组织-免疫荧光染色protocol说课讲解.pdfVIP

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组织免疫荧光步骤：

1）取出切片，用0.01MPBS冲洗5min×3次；

2）滴加10%正常山羊血清37℃封闭45min；

3）吸去多余液体，加入抗TSHR的一抗（1：100），放入湿盒中，37℃

孵育1h后置于4℃冰箱中过夜（保持在湿盒中）；

4）0.01MPBS冲洗5min×3次；

（至下一步开始要适度避光操作，防荧光淬灭！）

5）在黑暗条件下加入山羊抗兔IgG-FITC（1：200），37℃温育45min；

6）在黑暗条件下吸弃二抗(注：不再冲洗)，加入DAPI染液

（2.5μg/ml），室温作用20min；

7）在黑暗条件下0.01MPBS冲洗5min×6次；

8）在黑暗条件下防荧光淬灭剂封片，荧光显微镜下观察，用合适波

段激发，照相保存实验结果。

核实好下边的问题你就可以操作了：

1、准备0.01MPBS500ml，冲洗时动作既要轻柔防脱片，又要保证

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冲洗彻底；

2、

3、抗TSHR的一抗用1：100，用抗体稀释液稀释；

4、实验室有没有山羊抗兔IgG-FITC，使用浓度是1：200；

5、

6、DAPI染液（2.5μg/ml）实验室有吗？

7、

8、防荧光淬灭剂封片实验室有吗？

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