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2025年核酸方面考试题目及答案

一、单项选择题（每题2分，共40分）

1.关于核酸的化学组成，下列描述错误的是：

A.DNA的基本单位是脱氧核苷酸

B.RNA分子中含有尿嘧啶（U）

C.核酸分子的磷酸基团连接于戊糖的3’-羟基

D.双链DNA的稳定性主要依赖碱基堆积力和氢键

答案：C

解析：核酸分子中，磷酸基团连接于戊糖的5’-羟基（形成5’-磷酸酯键）和3’-羟基（形成3’-磷酸酯键），从而构成磷酸二酯键骨架，因此C选项错误。

2.实时荧光定量PCR（qPCR）中，Ct值的定义是：

A.荧光信号达到设定阈值时的扩增循环数

B.扩增产物达到平台期时的循环数

C.引物与模板结合的最适温度

D.反应体系中模板的初始拷贝数

答案：A

解析：Ct（CycleThreshold）值是荧光信号达到设定阈值时所经历的循环数，是qPCR定量的核心参数，A正确。

3.以下哪种技术属于等温核酸扩增技术？

A.聚合酶链式反应（PCR）

B.环介导等温扩增（LAMP）

C.连接酶链式反应（LCR）

D.转录介导扩增（TMA）

答案：B

解析：LAMP通过设计多对引物和链置换DNA聚合酶，在恒温（60-65℃）下完成扩增，属于等温技术；PCR需变温循环，LCR和TMA虽为其他扩增方式，但TMA需依赖RNA聚合酶，并非典型等温，故B正确。

4.核酸检测实验室生物安全二级（BSL-2）实验室的核心要求不包括：

A.实验室入口处设置生物危害标识

B.配备Ⅱ级或以上生物安全柜

C.实验区域与办公区域严格分开

D.所有操作必须在-80℃超低温冰箱中进行

答案：D

解析：BSL-2实验室要求包括分区管理、生物安全柜、标识等，但超低温冰箱用于样本保存，非操作必须条件，D错误。

5.核酸提取过程中，常用的裂解液成分不包括：

A.蛋白酶K

B.十二烷基硫酸钠（SDS）

C.乙二胺四乙酸（EDTA）

D.无水乙醇

答案：D

解析：无水乙醇用于核酸沉淀，属于提取后步骤；裂解液需破坏细胞膜和蛋白质，常用蛋白酶K（降解蛋白质）、SDS（破坏膜结构）、EDTA（螯合金属离子抑制核酸酶），故D错误。

6.某新冠核酸检测实验室在室内质控中发现，阴性对照出现微弱扩增曲线（Ct值38），最可能的原因是：

A.样本核酸浓度过高

B.引物二聚体形成

C.实验室气溶胶污染

D.扩增仪温度校准偏差

答案：C

解析：阴性对照应无扩增，若出现微弱信号，最可能为环境中残留的核酸气溶胶污染；引物二聚体通常Ct值较高但可能伴随熔解曲线异常，温度偏差多导致所有样本异常，故C正确。

7.关于数字PCR（dPCR）的特点，下列描述正确的是：

A.依赖Ct值进行相对定量

B.可直接检测目标核酸的绝对拷贝数

C.对扩增效率的要求高于qPCR

D.无法区分单碱基突变

答案：B

解析：dPCR通过将反应体系分割为数千个微滴，每个微滴含0或1个模板分子，扩增后统计阳性微滴数，直接计算绝对拷贝数，B正确；qPCR依赖Ct值相对定量，dPCR对扩增效率要求较低，且可通过探针设计区分突变。

8.核酸检测中，“假阴性”结果的常见原因不包括：

A.样本采集部位不准确（如新冠咽拭子未触及咽后壁）

B.扩增试剂过期导致酶活性下降

C.样本运输过程中未按要求冷藏（4℃）

D.目标区域存在高变异位点（如病毒突变株）

答案：C

解析：样本运输未冷藏可能导致核酸降解（假阴性），但4℃是常规保存条件，若短期运输未冷藏（如2小时内）影响较小；假阴性主因包括采集不到位、试剂失效、病毒变异导致引物/探针不匹配，故C表述不严谨，但严格来说，未冷藏可能引起降解，因此本题需选“不包括”的选项，正确答案为C（若运输时间过长未冷藏则可能导致假阴性，但若题目中“未按要求冷藏”指未用4℃而用常温短时间，可能不直接导致假阴性，需结合题干）。

9.以下哪种方法可用于检测RNA病毒核酸？

A.直接PCR（无需反转录）

B.反转录PCR（RT-PCR）

C.原位杂交（ISH）

D.限制性片段长度多态性（RFLP）

答案：B

解析：RNA病毒需先通过反转录酶生成cDNA，再进行PCR扩增（RT-PCR）；直接PCR仅适用于DNA模板，ISH可检测RNA但非扩增方法，RFLP用于DNA多态性分析，故B正确。

10.核酸检测实验室的“三区”划分是指：

A.试剂准备区、样本处理区、扩增分析区

B.清洁区、半污染区、污染区