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2025年核酸检测员证试题及答案

一、单项选择题（共20题，每题2分，共40分）

1.新型冠状病毒核酸检测常用的靶基因不包括以下哪项？

A.ORF1ab基因

B.N基因

C.S基因

D.GAPDH基因

答案：D

解析：GAPDH基因为内参基因，用于验证样本核酸提取的有效性，并非新型冠状病毒特异性靶基因。

2.核酸检测实验室中，用于样本处理和核酸提取的区域是？

A.试剂准备区

B.样本处理区（提取区）

C.扩增区

D.扩增产物分析区

答案：B

解析：PCR实验室通常分为四个独立区域：试剂准备区（配制反应体系）、样本处理区（提取核酸）、扩增区（进行PCR扩增）、扩增产物分析区（检测扩增结果）。

3.核酸提取过程中，若使用磁珠法，关键步骤不包括？

A.细胞裂解

B.磁珠与核酸结合

C.磁珠洗涤

D.酶切消化

答案：D

解析：磁珠法提取核酸的核心步骤为细胞裂解（释放核酸）、磁珠与核酸特异性结合（在高盐低pH条件下）、磁珠洗涤（去除杂质）、核酸洗脱（低盐高pH条件下脱离磁珠）。酶切消化多用于基因工程，非常规核酸提取步骤。

4.实时荧光定量PCR（qPCR）中，Ct值的定义是？

A.扩增产物达到设定阈值时的循环数

B.扩增反应的初始模板量

C.荧光信号达到平台期的时间

D.反应体系的最大荧光值

答案：A

解析：Ct值（CycleThreshold）指荧光信号达到设定阈值时所经历的循环数，与初始模板量的对数成反比，是定量分析的核心参数。

5.核酸检测样本采集时，咽拭子应擦拭的部位是？

A.舌尖

B.扁桃体隐窝及咽后壁

C.软腭

D.牙龈

答案：B

解析：咽拭子采集需用拭子越过舌根，在两侧扁桃体隐窝及咽后壁适度用力擦拭，确保采集到呼吸道上皮细胞。

6.新冠病毒核酸检测样本的短期保存（48小时内）应置于？

A.25℃室温

B.4℃冰箱

C.-20℃冰箱

D.-80℃冰箱

答案：B

解析：《新型冠状病毒肺炎实验室检测技术指南》规定，样本采集后应尽快送检；48小时内检测的样本可4℃保存，长期保存需-20℃或-80℃。

7.以下哪种情况会导致qPCR结果出现假阴性？

A.样本采集量不足

B.扩增仪温度校准偏差（退火温度过低）

C.反应体系中引物浓度过高

D.荧光探针标记错误

答案：A

解析：样本采集量不足（如咽拭子未接触到感染部位）会导致核酸模板量过低，可能低于检测限，出现假阴性；B、C、D选项更可能导致假阳性或扩增效率异常。

8.核酸检测实验室的生物安全等级应为？

A.BSL-1

B.BSL-2

C.BSL-3

D.BSL-4

答案：B

解析：新型冠状病毒属于第二类病原微生物，其核酸检测（非活病毒操作）应在BSL-2实验室进行；涉及病毒分离培养时需BSL-3。

9.核酸提取过程中，使用75%乙醇洗涤磁珠的主要目的是？

A.裂解细胞

B.灭活病毒

C.去除蛋白质、盐离子等杂质

D.促进核酸与磁珠结合

答案：C

解析：75%乙醇洗涤可溶解残留的蛋白质、盐类等杂质，同时保持核酸与磁珠的结合状态（高盐条件下），最终通过洗脱步骤获得纯净核酸。

10.以下关于实验室污染控制的说法，错误的是？

A.不同区域的物品严格区分，不得交叉使用

B.扩增产物分析区可使用紫外灯消毒

C.样本处理区应配置生物安全柜

D.实验结束后，工作台面用1%次氯酸钠擦拭

答案：B

解析：扩增产物分析区（如电泳区）存在大量PCR产物（DNA片段），紫外灯无法有效降解已扩增的DNA（需配合脱氧核糖核酸酶或专门的污染清除试剂）；试剂准备区和样本处理区可使用紫外灯消毒。

11.核酸检测质量控制中，阴性对照的作用是？

A.验证试剂有效性

B.检测是否存在交叉污染

C.校准扩增仪温度

D.评估样本核酸提取效率

答案：B

解析：阴性对照（无模板的反应体系）用于监测实验过程中是否存在环境或试剂污染（如气溶胶污染），若阴性对照出现扩增曲线，则提示污染。

12.新冠病毒核酸检测的金标准是？

A.抗原检测

B.抗体检测

C.实时荧光定量PCR

D.病毒分离培养

答案：C

解析：实时荧光定量PCR因灵敏度高、特异性强，是目前新冠病毒核酸检测的金标准；病毒分离培养虽为“金标准”，但操作复杂、耗时，不用于常规检测。

13.核酸提取仪的日常维护不包括？

A.