2025年核酸检测pcr考试试题及答案.docxVIP

2025年核酸检测pcr考试试题及答案

一、单项选择题（每题2分，共30题，计60分）

1.聚合酶链式反应（PCR）技术的核心酶是

A.DNA连接酶

B.逆转录酶

C.TaqDNA聚合酶

D.限制性内切酶

答案：C

2.荧光定量PCR中，Ct值指的是

A.扩增产物达到平台期的循环数

B.荧光信号达到设定阈值时的循环数

C.引物与模板结合的最佳温度

D.反应体系中dNTP完全消耗的时间点

答案：B

3.进行RNA病毒PCR检测时，第一步需要进行的操作是

A.逆转录反应（RT）

B.设计特异性引物

C.提取病毒RNA

D.配置PCR反应体系

答案：C

4.引物设计时，GC含量通常建议控制在

A.10%-20%

B.20%-30%

C.40%-60%

D.70%-80%

答案：C

5.下列哪种物质会显著抑制Taq酶活性？

A.EDTA

B.甘油

C.BSA（牛血清白蛋白）

D.二甲基亚砜（DMSO）

答案：A

6.实时荧光定量PCR的扩增曲线通常分为几个阶段？

A.1个（指数增长期）

B.2个（指数期、平台期）

C.3个（基线期、指数期、平台期）

D.4个（初始期、指数期、线性期、平台期）

答案：C

7.核酸提取过程中，使用氯仿的主要目的是

A.裂解细胞

B.沉淀核酸

C.去除蛋白质

D.提高pH值

答案：C

8.进行PCR实验室分区时，正确的操作流程是

A.试剂准备区→样本处理区→扩增区→产物分析区

B.样本处理区→试剂准备区→扩增区→产物分析区

C.产物分析区→扩增区→样本处理区→试剂准备区

D.试剂准备区→扩增区→样本处理区→产物分析区

答案：A

9.检测新型冠状病毒（RNA病毒）时，若样本中同时加入内参基因（人源管家基因），其主要作用是

A.提高扩增效率

B.验证样本核酸提取质量

C.降低假阳性率

D.减少引物二聚体

答案：B

10.扩增产物长度为200bp时，延伸时间一般设置为

A.5-10秒

B.30秒

C.1分钟

D.2分钟

答案：B

11.下列哪种情况会导致PCR出现假阴性结果？

A.引物与模板非特异性结合

B.样本中存在Taq酶抑制剂

C.扩增仪温度波动±0.5℃

D.产物分析时电泳电压过高

答案：B

12.核酸提取后，使用分光光度计检测A260/A280比值为1.2，说明

A.核酸纯度高

B.蛋白质污染严重

C.盐离子残留过多

D.RNA降解

答案：B

13.数字PCR（dPCR）与实时荧光定量PCR（qPCR）的主要区别在于

A.dPCR不需要引物

B.dPCR通过绝对定量而非相对定量

C.dPCR扩增效率更高

D.dPCR仅用于DNA检测

答案：B

14.实验室高压蒸汽灭菌的标准条件是

A.100℃，30分钟

B.121℃，15-20分钟

C.160℃，2小时

D.200℃，1小时

答案：B

15.处理PCR产物时，正确的生物安全操作是

A.直接丢弃至普通垃圾桶

B.10%次氯酸钠浸泡30分钟后高压灭菌

C.用75%乙醇擦拭后丢弃

D.冷冻保存以备重复检测

答案：B

16.引物二聚体形成的主要原因是

A.引物浓度过低

B.退火温度过高

C.引物3’端互补

D.dNTP浓度不足

答案：C

17.进行多重PCR时，最关键的优化参数是

A.引物特异性

B.模板浓度

C.反应体积

D.扩增循环数

答案：A

18.下列哪种样本类型对核酸提取质量影响最大？

A.血清

B.咽拭子

C.粪便

D.全血

答案：C

19.荧光探针法（如TaqMan探针）与SYBRGreen法相比，优势在于

A.成本更低

B.特异性更高

C.操作更简单

D.可同时检测多个靶标

答案：B

20.扩增仪温度校准的频率应为

A.每月1次

B.每季度1次

C.每半年1次

D.每年1次

答案：C

21.核酸提取时，若使用磁珠法，关键步骤是

A.加入蛋白酶K

B.磁珠与核酸的结合及洗脱

C.氯仿抽提

D.乙醇沉淀

答案：B

22.检测结果为“临界值”（