抗菌肽Turgencin A在毕赤酵母中重组表达及其抗菌活性特性研究.pdfVIP

摘要

由于抗生素的广泛使用，细菌耐药性日益严重，多重耐药（MDR）甚至泛耐药（XDR）

细菌在世界各地广泛传播，寻找抗生素替代品已是迫在眉睫。抗菌肽是在生物体中产

生的小分子肽，在先天免疫中起重要作用。抗菌肽显示出了广谱抗菌活性，它们不仅

可以杀死不同细菌，还可以杀死各种真菌和寄生虫，原生动物与癌细胞。因抗菌肽的

广谱抗菌性、热稳定性好、无毒副作用、无残留、在杀灭细菌的同时还能提高机体免

疫力、不易产生耐药性等诸多优点，是目前国际上普遍认可的具有潜在替代抗生素作

用的药物。

抗菌肽TurgencinA是一种在北极海鞘中分离出来的强效抗菌肽，由36个氨基酸

残基和三个二硫键组成。对革兰氏阴性和革兰氏阳性细菌菌株均具有抑菌活性。并且

对pH和温度都有较高的稳定性，是潜在的抗生素替代物质，具有极大地应用研究价

值。但是天然抗菌肽TurgencinA在生物体内的含量低，在生物体内获得抗菌肽的资

源有限，而使用化学合成该抗菌肽的方法难以体现出它的二三级结构，并且成本高昂，

所以，本课题采用基因工程的方法来大量获取抗菌肽TurgencinA。

本课题中，构建了毕赤酵母菌株来高效表达重组抗菌肽TurgencinA（rTurgencin

A）。在诱导表达120h时，目的蛋白表达量达到最高。进一步对rTurgencinA进行了

生物学特性研究包括抑菌圈实验、最小抑菌浓度（MIC）实验、稳定性实验、溶血性

实验，和抗菌机制研究包括总核苷酸泄漏实验、电镜实验、细胞膜渗透实验。结果表

明，rTurgencinA对革兰氏阴性和革兰氏阳性细菌菌株均具有抑菌活性，测量的MIC

值在2-5μg/mL之间，体现了其较强的广谱抗菌活性。不仅如此，rTurgencinA还表现

出了较强的稳定性，在不同的温度、pH、蛋白酶和盐离子浓度作用下均具有较强的抑

菌活性，表明了其潜在应用的可能性。在抗菌机制研究中通过总核苷酸泄漏实验、电

镜实验、细胞膜渗透实验发现rTurgencinA能使细菌表面形成孔洞，导致细菌的内容

物外泄，从而导致细菌细胞死亡。在溶血实验中发现rTurgencinA在5×MIC的作用下

未产生溶血反应。最后，将rTurgencinA在猪肉保鲜的应用上进行了研究。结果表明，

rTurgencinA在猪肉的冷鲜保存中可以有效地降低猪肉中的细菌总数，并对猪肉的感

官具有良好的保持作用。

综上所述，rTurgencinA具有的强广谱抗菌活性、强稳定性、低溶血活性使其极有

潜力开发成为抗生素的替代品以及新型生物防腐保鲜剂。

关键词：抗菌肽；TurgencinA；毕赤酵母；抗菌活性；保鲜

ABSTRACT

Duetothewidespreaduseofantibiotics,bacterialresistancecontinuestoincrease,and

multidrug-resistant(MDR)andevenpanresistant(PDR)bacteriaarewidelyspreadaround

theworld,makingiturgenttofindalternativeantibiotics.Antibacterialpeptidesaresmall

moleculepeptidesproducedinorganismsandplayanimportantroleininnateimmunity.

Antibacterialpeptidesexhibitbroad-spectrumantibacterialactivity,notonlykillingdifferent

bacteria,butalsokillingvariousfungi,parasites,protozoa,andcancercells.Duetoitsbroad-

spectrumantibacterialproperties,abilitytokillbacteriawhileenhancingthebodysimmunity,

goodthermalstability,no