糖化血红蛋白检测操作细则.pptxVIP

演讲人：

日期:

糖化血红蛋白检测操作细则

目录

CATALOGUE

01

检验原理概述

02

样本采集与处理

03

检测操作流程

04

质量控制要求

05

结果分析与报告

06

设备维护与管理

PART

01

检验原理概述

检测方法学基础

基于糖化血红蛋白与非糖化血红蛋白在色谱柱中的保留时间差异进行分离定量，具有高精度和特异性，是国际公认的金标准方法。

高效液相色谱法（HPLC）

利用糖化血红蛋白特异性抗体与样本中目标分子结合形成浊度，通过光学检测浊度变化计算浓度，适用于自动化分析仪但可能受变异血红蛋白干扰。

免疫比浊法

通过电场作用下血红蛋白各组分的迁移率差异实现分离，可区分HbA1c与其他血红蛋白变体，但操作复杂且耗时较长。

电泳法

葡萄糖与血红蛋白β链N端缬氨酸通过醛胺缩合形成不稳定的希夫碱，随后经分子重排生成稳定的酮胺结构（HbA1c），此过程与血糖浓度和时间呈正相关。

生化反应过程

非酶糖化反应

反应速率受血糖水平、红细胞寿命（约120天）及渗透压影响，因此HbA1c反映个体近8-12周平均血糖水平。

糖化血红蛋白形成动力学

样本需溶血释放血红蛋白，并通过缓冲液调节pH值以稳定糖化与非糖化组分的电荷差异，确保检测准确性。

检测前处理

临床意义说明

糖尿病诊断与监测

HbA1c≥6.5%可作为糖尿病诊断标准之一，定期检测可评估长期血糖控制效果，指导治疗方案调整。

并发症风险预测

HbA1c每升高1%，微血管病变风险增加37%，心肌梗死风险增加18%，是心血管事件和肾病进展的独立预测因子。

局限性及干扰因素

溶血性贫血、血红蛋白病（如HbS、HbE）及近期输血可能导致假性降低或升高，需结合其他指标综合判断。

PART

02

样本采集与处理

采血管类型要求

必须使用紫色头盖的EDTA-K2或EDTA-K3抗凝管，确保血液与抗凝剂充分混合，避免凝血现象影响检测结果。

EDTA抗凝管

推荐使用标准真空采血管，保证采血量准确，避免因血量不足或过量导致抗凝剂比例失调。

真空采血系统

采血管需明确标注患者信息、采集时间及唯一编号，防止样本混淆或信息丢失。

管壁标识清晰

样本离心条件

离心速度与时间

样本采集后需在室温下静置，离心机转速设定为3000-3500转/分钟，持续离心至少10分钟，确保血浆与血细胞完全分离。

离心温度控制

离心后应立即分离上清血浆，若不能及时检测，需将样本加盖密封，避免蒸发或污染。

离心过程需在室温（20-25℃）环境下进行，避免高温或低温导致红细胞破裂或血红蛋白变性。

离心后处理

短期储存条件

若样本需在24小时内检测，可置于2-8℃冷藏保存，避免反复冻融或长时间暴露于室温环境。

长期冷冻要求

如需长期保存，样本应分装后置于-70℃以下超低温冰箱，避免冰晶形成破坏红细胞结构。

运输防护措施

运输过程中需使用生物安全二级包装，内置吸湿材料和防震装置，确保样本温度稳定且符合冷链运输标准。

储存运输规范

PART

03

检测操作流程

试剂储存条件确认

严格核对试剂盒外包装标注的有效期，禁止使用过期试剂，同时记录试剂批号以便追溯。

试剂有效期核查

试剂配制标准化

按照说明书要求精确配制工作液，避免浓度误差，配制后需静置至室温并混匀，确保反应体系稳定性。

确保试剂盒在规定的温度范围内保存，避免阳光直射或反复冻融，使用前检查试剂瓶是否有泄漏或沉淀物。

试剂准备与检查

仪器校准步骤

多点校准执行

根据仪器要求进行低、中、高值校准，每个浓度点重复检测至少两次，确保校准曲线线性良好。

校准品选择与处理

使用与检测系统匹配的校准品，校准前需平衡至室温，避免温度差异导致校准偏差。

校准结果验证

校准完成后需运行质控样本验证，若质控值超出允许范围，需重新校准并排查仪器或试剂问题。

质控品插入规则

质控频率设定

每批次检测前后均需插入质控品，连续检测时每隔一定样本量需追加质控，确保全程监控检测稳定性。

质控品浓度覆盖

质控数据记录与分析

选择涵盖医学决定水平（如正常值、临界值、异常值）的质控品，以评估检测系统在不同浓度下的性能。

详细记录质控结果并绘制质控图，使用Westgard规则判断是否失控，若失控需暂停检测并启动纠正措施。

1

2

3

PART

04

质量控制要求

室内质控执行频率

每批次样本检测中

每隔一定样本量（如20-30例）插入质控品，监测检测过程的重复性和准确性。

长期稳定性监控

每周至少进行一次多水平质控品检测，覆盖低、中、高浓度范围。

每日开机后首次检测前

需运行至少两个浓度水平的质控品，确保仪器性能稳定且检测系统处于可控状态。

更换试剂或校准后

必须重新执行质控程序，验证试剂批间差或校准曲线的有效性。

失控处理流程

立即重复检测失控质控品，排除操作误差或偶然因素，确认失控是否持续存在。

初步复测与确认

核查