胰腺特异性基因治疗递送系统构建及重组蛋白表达分析.pdfVIP

摘要

肠促胰岛素在治疗糖尿病方面有很大的潜力，它们是一种通过肠道内分泌细

胞分泌的激素，并且以葡萄糖依赖的方式刺激胰岛素分泌，同时抑制餐后胰高血糖

素的分泌，包括葡萄糖依赖性胰岛素性多肽（GIP）和胰高血糖素样肽-1（GLP-1）。

以肠促胰岛素为基础的治疗由于疗效好、耐受性好、低血糖风险低的突出特点，越

来越作为一种2型糖尿病（Type2diabetes，T2DM）治疗的理想选择。腺相关病毒

（Adeno-associatedvirus，AAV）载体系统是一种体内外基因传递系统，对哺乳动

物等多种类型细胞具有高效的转导效率。它的免疫原性极低，宿主范围广，并且体

内外实验均有效。

本研究通过荧光素酶报告基因系统筛选一系列载体元件，以重组腺相关病毒

AAV为载体，构建一个在胰腺中特异表达的递送系统，并且插入促进分泌的信号

肽，以实现目的基因在胰腺细胞中高度特异性分泌表达。天然GLP-1或受体激动

剂的分子量很小，对中枢神经系统有很大影响。本研究同时利用免疫球蛋白重链与

目的蛋白融合，通过内部核糖体进入位点序列（Internalribosomeentrysite，IRES）

实现GLP-1和GIP的同时表达，利用Fc在体内的自组装，进行病毒包装验证表达

分析，从而增大分子量，以减弱经过血脑屏障的恶心、体重减轻等副作用，有望提

高患者的生存质量，在疾病的诊断与治疗方面有重要的意义。

关键词:肠促胰岛素；AAV腺相关病毒载体；胰腺特异性

Abstract

Increinshavegreatpotentialinthetreatmentofdiabetes.Theyareahormone

secretedbyendocrinecellsinthegutandstimulateinsulinsecretioninaglucose-

dependentmannerwhileinhibitingpostprandialglucagonsecretion,includingglucose-

dependentinsulinpolypeptide(GIP)andglucagon-likepeptide-1(GLP-1).Insulinbased

therapyisincreasinglybeingusedasanidealtreatmentfortype2diabetesmellitus

(T2DM)duetoitsgoodefficacy,goodtoleranceandlowriskofhypoglycemia.Adeno-

associatedvirus(AAV)vectorsystemisaninvitroandinvivogenedeliverysystemwith

hightransductionefficiencyformanytypesofmammaliancells.Ithaslow

immunogenicity,widehostrangeandiseffectiveinbothinvitroandinvivo.

Inthisstudy,aseriesofvectorelementswerescreenedbytheluciferasereporter

system,andrecombinantadeno-associatedvirus(AAV)wasusedasthevectorto

constructadeliverysystemspecificallyexpressedinthepancreas,andsignalpeptides

promotingsecretionwereinsertedtoachievehighlyspecificsecretionandexpressionof

targetgenesinpancreaticcel