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星油藤遗传转化体系构建与WOX基因家族表达特征解析

一、引言

1.1研究背景与意义

星油藤（PlukenetiavolubilisL.），又名美藤果、南美油藤，属大戟科多年生木质藤本植物，原产于南美洲安第斯山脉的热带雨林。其种子油富含不饱和脂肪酸，特别是α-亚麻酸含量高达48-54%，具有预防心血管疾病、保养肌肤等功效，在食品、保健品和化妆品等领域应用前景广阔。此外，星油藤生长迅速、适应性强，可在贫瘠土地生长，有助于生态修复和土地利用，还能为农民提供经济收入，促进乡村振兴。如在广西崇左市宁明县，星油藤产业已成为当地经济发展和农民增收的重要支柱，通过“公司+基地+农户”模式，带动了大量农户参与种植和加工，推动了当地经济增长和就业。

目前，星油藤的遗传转化体系尚未完善，限制了通过基因工程技术对其进行品种改良和功能基因研究。遗传转化体系是将外源基因导入植物细胞并使其稳定表达的技术平台，对深入研究星油藤基因功能、改良品种特性至关重要。例如，通过遗传转化可导入抗病虫害基因，增强星油藤抗逆性，减少农药使用，实现可持续发展；导入提高油脂含量或改善脂肪酸组成的基因，能提升星油藤种子油品质和营养价值，满足市场需求。

WOX（WUSCHEL-relatedhomeobox）基因家族是植物特有的一类转录因子，在植物胚胎发育、干细胞维持、器官形成和发育等过程中起关键调控作用。在拟南芥中，WOX基因家族成员参与了胚胎早期发育、根和茎顶端分生组织维持以及侧根形成等重要过程。研究星油藤WOX基因家族表达，有助于揭示其生长发育分子机制，为通过基因调控手段优化星油藤生长和发育、提高产量和品质提供理论依据。例如，了解WOX基因在星油藤花芽分化中的作用，可通过调控该基因表达，增加雌花数量，提高种子产量。

1.2星油藤研究现状

在种植与培育方面，星油藤自2006年被引入中国科学院西双版纳热带植物园后，已在云南、海南、广东、广西等热带和干热河谷地区广泛种植。研究人员对其生长习性、栽培技术和病虫害防治等进行了大量研究，总结出了一系列适合不同地区的种植技术和管理方法。如在广西，通过合理的套种模式和田间管理措施，提高了星油藤的产量和品质。在广西崇左市宁明县，采用“星油藤+坚果”套种模式，充分利用了土地资源，提高了单位面积的经济效益。同时，通过加强田间管理，如合理施肥、病虫害防治等，使星油藤的产量和品质得到了显著提升。

在基因研究方面，已有对星油藤主要组织器官转录组测序分析，获得了大量基因序列信息，初步鉴定出一些参与脂肪酸合成代谢和其他重要生理过程的基因。如通过转录组测序，发现脂肪酸去饱和酶基因FAD3和FAD7可能对α-亚麻酸在星油藤种子中的积累起到重要作用。然而，星油藤的遗传转化研究仍处于起步阶段，相关技术体系尚未成熟，转化效率较低，限制了基因功能验证和遗传改良研究。同时，对于星油藤生长发育过程中关键基因家族，如WOX基因家族的研究还十分有限，其成员鉴定、表达模式和功能机制尚不清楚。

1.3研究目标与内容

本研究旨在建立高效稳定的星油藤遗传转化体系，为基因功能研究和遗传改良提供技术支持；同时，系统分析星油藤WOX基因家族成员的表达模式，初步探索其在星油藤生长发育中的功能。

具体研究内容包括：首先，优化星油藤组织培养条件，建立高频再生体系，为遗传转化提供良好的受体材料；其次，探索适合星油藤的遗传转化方法，如农杆菌介导法和基因枪法，优化转化参数，提高转化效率，建立稳定的遗传转化体系；然后，通过生物信息学方法，从星油藤基因组中鉴定WOX基因家族成员，分析其基因结构、保守结构域和系统进化关系；最后，利用实时荧光定量PCR等技术，研究WOX基因家族成员在星油藤不同组织器官和发育阶段的表达模式，初步揭示其在星油藤生长发育中的功能。

二、星油藤遗传转化体系的建立

2.1材料与方法

2.1.1实验材料

本研究选用的星油藤品种为‘版纳1号’，由中国科学院西双版纳热带植物园提供，该品种在当地种植表现出良好的适应性和生长特性。实验所需的各类试剂包括限制性内切酶、T4DNA连接酶、DNA聚合酶、卡那霉素、潮霉素、头孢霉素、乙酰丁香酮等，均购自Sigma-Aldrich、TaKaRa等知名试剂公司，以确保试剂的质量和稳定性。主要仪器设备有PCR扩增仪（Bio-Rad公司，型号：C1000Touch）、凝胶成像系统（Bio-Rad公司，型号：GelDocXR+）、离心机（Eppendorf公司，型号：5424R）、超净工作台（苏州净化设备有限公司，型号：SW-CJ-2FD）、光照培养箱（上海一恒科学仪器有限公司，型号：MGC-350HP）