第2章蛋白质和主要必需氨基酸的测定.pptVIP

适用于大批品种筛选、育种等工作中的蛋白质测定。一般的生化分析中采用的双缩脲试剂是碱性硫酸铜水溶液，不适用于种子蛋白质的分析，因为它不稳定，而且会浸出有色物质、脂肪及一些淀粉物质，干扰比色测定。而异丙醇双缩脲试剂，可以减少这些物质的溶解，排除干扰。本法对温度及时间的要求严格，否则再现性不高。采用室温20-25℃，须于120～190min内比色；40℃为15-70min显色稳定；而在60℃连续振荡条件下显色，则反应时间缩短为5min。注意问题第29页，共44页，星期日，2025年，2月5日第三节氨基酸的测定氨基酸分析方法包括测定氨基酸的总含量及测定全氨基酸中每种氨基酸的含量两个方面。测定氨基酸总量的方法与蛋白质分析有密切的关系。许多测定蛋白质含氮含量的方法如开氏定氮法及各种比色法均可用于测定氨基酸的总含量。测定氨基酸总含量的方法还有甲醛滴定法，方法简单，快速，广泛应用于实际工作中。第30页，共44页，星期日，2025年，2月5日全氨基酸：色谱法测定。薄层层析色谱法：60年代发展起来的分析方法，操作简便，设备简单、层析速度快、灵敏度高，广泛应用于分离和测定氨基酸。气相色谱法：气相色谱法具有分析速度快、灵敏度高的特点，仪器的成本也比氨基酸自动分析仪低。尤其是在分析氨基酸的对映异构物及超微量(ng)样品中气相色谱有特殊的作用。氨基酸自动分析仪：应用最广泛的分析氨基酸的专用仪器。该仪器的基本原理仍然是离子交换柱层析。第三节氨基酸的测定第31页，共44页，星期日，2025年，2月5日第1页，共44页，星期日，2025年，2月5日第一节概述蛋白质是植物的重要组成成分，也是农产品品质中最重要的成分。它的含量依作物种类、部位、生育时期、品种特性而有变化。植物各部位器官中蛋白质含量也不同，其中以籽粒中最多，如豆类可达45％-55％，其次是花、叶、茎和根。作物在不同的生育阶段根部位吸收的氮，不断向新生组织输送，在接近成熟时期，茎叶中的氮向贮存器官输送，合成的蛋白质集中于种子中。第2页，共44页，星期日，2025年，2月5日各种农产品中蛋白质的含量水平（%）作物蛋白质（干基）作物蛋白质（干基）作物蛋白质（干基）作物蛋白质（干基）菜豆洋扁豆速豌豆蚕豆大豆亚麻向日葵(仁)棉籽(仁)小麦黑麦15.0~30.524.6~34.122.0~34.027.0~35.029.4~50.42.0~30.821.1~30.228.6~42.019.3~30.014.4~24.1大麦燕麦稻米玉米小米(仁)高梁荞麦(仁)10.6~20.48.0~17.37.8~14.59.0~13.210.2~21.59.5~15.312.8~19.0马铃薯冬油菜甜菜萝卜胡萝卜洋葱大蒜菠菜芹菜番茄0.7~2.71.0~1.50.7~1.40.6~1.20.6~1.91.9~2.86.72.31.3~3.60.3~0.8茄辣椒南瓜黄瓜甘蓝花椰菜浆果核桃高梁叶高梁茎0.6~1.20.7~1.10.4~1.00.5~0.91.2~2.62.40.3~1.916.1~28.912.4~17.54.0~7.5第3页，共44页，星期日，2025年，2月5日蛋白质是生命的物质基础，它的含量是衡量农、畜、水产品品质和营养价值的重要指标。测定植物各部分中蛋白质的含量，对其品质鉴定、品种选育、改善作物生育条件和调节作物体内新陈代谢和提高蛋白质含量等有重要意义。对产品加工方式及其产品质量有影响。在育种、食品和饲料等工作中常常需要测定蛋白质的含量。为什么要测定蛋白质？第4页，共44页，星期日，2025年，2月5日氨基酸是组成蛋白质的基本单位，也是蛋白质的分解产物。氨基酸的分析测定是研究蛋白质、酶的化学组成及性质的重要手段。动植物产品中的氨基酸以多种形式存在，大致可分为构成蛋白质的氨基酸和游离的氨基酸两种。“第一、第二限制氨基酸”的赖氨酸和色氨酸，是必需氨基酸，但人类和动物自身无法合成，须从食物中直接吸收。氨基酸的含量是衡量谷物、饲料蛋白质的重要标准之一。为什么要测定氨基酸？第5页，共44页，星期日，2025年，2月5日蛋白质的分析方法很多，可分为两类：(1)利用蛋白质的共性，即含氮量；(2)利用蛋白质中特定氨基酸残基、酸(碱)性基团和芳香基团测定蛋白质含量。最常用的方法是开氏（凯氏）法——测定含氮量。粗蛋白质：开氏法测定结果中因其含有氨基酸、酰胺等非蛋白质氮，故称“粗蛋白质”纯蛋白质：开氏法测定中，如果蛋白质用重金属盐等沉淀分离