细胞培养技术讲课文档.ppt

细胞培养技术;;;1.构成：

①照明系统

②光学放大系统

③机械装置

2.原理：经物镜形成倒立实像，经目镜放大成虚像。;第五页，共79页。;显微镜的几个光学特点：

介质折射率越接近镜头玻璃的（1.7）越好；

sinα/2的最大值小于1；油镜介质为香柏油，镜口率可接近1.5；

普通光线的波长为400~700nm，光镜分辨力约为0.2μm，人眼的分辨力为0.2mm，因此显微镜的最大有效倍数为1000X。;（二）荧光显微镜Fluorescencemicroscope;Fluorescenceimage,DNAinblueandMicrotubulesingreen;（三）激光共聚焦扫描显微境

Laserconfocalscanningmicroscope,LCSM;laserconfocalscanningmicroscope,LCSM;LCSMImageofaXenopusMelanophore

microtubulecytoskeleton(green)andthenucleus(blue)itg.uiuc.edu/;（四）暗视野显微镜darkfieldmicroscope;把透过标本的可见光的光程差变成振幅差，从而提高了各种结构间的对比度，使各种结构变得清晰可见。在构造上，相差显微镜有不同于普通光学显微镜两个特殊之处。

环形光阑（annulardiaphragm）：位于光源与聚光器之间。

相位板（annularphaseplate）：物镜中加了涂有氟化镁的相位板，可将直射光或衍射光的相位推迟1/4λ。;用途：观察未经染色的玻片标本。;（六）偏光显微镜polarizingmicroscope;（七）微分干涉差显微镜Differentialinterferencecontrastmicroscope（DIC）;（八）倒置显微镜inversemicroscope;（九）当代显微镜的发展趋势;二、电子显微镜;以电子束作光源，电磁场作透镜。电子束波长与加速电压(通常50~120KV)的平方根成反比；

由电子照明系统、电磁透镜成像系统、真空系统、记录系统、电源系统等5部分构成；

分辨力0.2nm，放大倍数可达百万倍；

用于观察超微结构（小于0.2μm）。;表二、不同光线的波长;透射电子显微镜;人类红细胞;酵母;人类精子;（三）扫描隧道显微镜

scanningtunnelingmicroscope，STM;STMimageofaDNAmolecule;三、显微操作技术

micromanipulationtechnique;显微操作仪;;小结;细胞培养用液和培养基;水：

平衡盐溶液（BBS）：

消化液：

维生素液：

染色液：;（一）水;（二）平衡盐溶液;（三）消化液;细胞培养用容器及培养基

Culturevesselsandmedium

foranimalcellculture;培养基（液）是??持体外细胞生存和生长的溶液

天然培养基：

合成培养基：氨基酸、维生素、糖类

无机离子、其它成分

无血清培养基：

;（一）天然培养基;血清(serum)：一般常用为小牛血清(包括胎牛血清)，人血清和其它动物血清。

外观：透明淡黄色，无溶血，无沉淀。

灭活：56度，30min消除补体活性。

成分：总蛋白3.5-4.5g/100ml

球蛋白不高于2g/100ml

;第四十一页，共79页。;①多种PR（白蛋白、球蛋白、铁蛋白等）

②多种金属离子

③激素

④促贴附物质，如纤粘蛋白、冷析球蛋白、胶原等。

⑤各种生长因子

⑥转移蛋白

⑦不明成分;关于血清的几个问题;瓶装(500ml)血清解冻步骤(逐步解冻法):-20℃或–70℃至4℃冰箱溶解一天，至室温下全溶后再分装，一般以50ml无菌离心管可分装40～45ml。在溶解过程中须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡)，使温度与成分均一，减少沈淀的发生。

勿直接由–20℃直接至37℃解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沈淀。;血浆：1907年Harrison首次使用

优点：支持培养组织块，供给细胞生长物质。

缺点：易于液化。;（二）合成培养基;199液：成分多达69种，单独使用只能维持细胞生长数天，应用不多。在生理盐水的基础上加入氨基酸、维生素、嘌呤、嘧啶、胆固醇、ATP等。

Eagle培养液：

MEM（Eagle’sminimumessentialmedium）

BME（BasalEagleMedium）

DMEM