2026版湖南版选考总复习生物53A版精讲册PPT 第24章　基因工程.pptxVIP

第5部分生物技术与工程

第24章基因工程;目录;;一、重组DNA技术的基本工具;“分子缝

合针”——

DNA

连接酶;易混易错????DNA连接酶和DNA聚合酶的异同;二、DNA的粗提取;真题选改判;教考衔接;解析限制酶失活会使DNA完全不被酶切,此时应更换新的限制酶,A正确;酶切条件不

合适通常会使切割效果下降,此时应有部分DNA被酶切,即使酶切条件导致限制酶失

活,而使DNA完全没有被酶切,也不能通过改变“酶的用量”来调整反应,B错误;质粒

DNA突变导致限制酶识别位点缺失,会造成限制酶无法进行切割,因此应更换为正常质

粒DNA,C正确;质粒DNA上酶切位点被甲基化修饰,会导致对DNA甲基化敏感的限制

酶无法进行酶切,此时应换用对DNA甲基化不敏感的限制酶,D正确。;链接教材选必3P71限制酶的来源与作用;;一、基因工程的基本操作程序;2.基因表达载体的构建(基因工程的核心步骤);构建基因

表达载体

过程

示意图;易混易错????启动子、终止子、起始密码子、终止密码子对比;3.将目的基因导入受体细胞;知识拓展????农杆菌转化法示意图

?;4.目的基因的检测与鉴定;个体生物学水平的鉴定;二、基因工程的应用

?;简介;易混易错????蛋白质工程中通过对基因操作来实现对天然蛋白质的改造的原因:蛋白质

一般具有十分复杂的空间结构,基因的结构相对简单,容易改造;改造后的基因可以遗传

给下一代,而直接改造的蛋白质无法遗传。;知识归纳????基因工程和蛋白质工程的判断

(1)基因工程是通过转基因等技术,将已有的DNA序列转移给其他生物;蛋白质工程是

从对蛋白质的需求出发,在DNA水平上改变氨基酸的编码序列,定点诱变,改变特定的

核苷酸,也可以进行蛋白水平上的改变,主要通过对制造出的蛋白质进行加工、修饰,如

磷酸化、糖基化等,从而改变蛋白质的功能。

(2)如果合成的蛋白质是天然蛋白质,则是基因工程;如果合成的蛋白质和天然蛋白质有

差异,甚至是自然界中所没有的,则为蛋白质工程。;真题选改判;2.(2023辽宁,8)将红色荧光蛋白RFP基因(在下游)与CD163基因(在上游)拼接在一起,使

其表达成一条多肽,该拼接过程的关键步骤是除去CD163基因中编码起始密码子的序

列。(????);从真题到教材;6.将目的基因导入受体细胞:植物常采用农杆菌转化法,需将目的基因插入Ti质粒的

????????中(选必3P81)(2023广东,20)。动物常采用显微注射技术将目的基因导入

????????;将目的基因导入大肠杆菌时需先用????处理,使之处于一种能吸收周

围环境中DNA分子的生理状态(选必3P82)。

?;一、限制酶的选择;2.同尾酶的使用

同尾酶是指识别DNA分子中不同核苷酸序列,但能切割产生相同末端的限制酶,如图:

?

由同尾酶产生的黏性末端,能够通过碱基互补配对彼此连接,可用于基因表达载体的构建。

实例分析:图2质粒为载体,图3为克隆得到的含W基因的DNA片段,W基因以乙链为转

录模板链(MfeⅠ和EcoRⅠ为同尾酶,可切出相同的黏性末端)。;限制酶选择分析:图2质粒中含2个EcoRⅠ识别位点,选用EcoRⅠ会切去终止子,选用

BamHⅠ会破坏启动子,故可选用的限制酶有MfeⅠ、HindⅢ、KpnⅠ;W基因以乙链为

转录模板链,RNA聚合酶从模板链的3端开始转录,故W基因乙链的3端与启动子相连,5

端与终止子相连,为保证W基因与质粒正确连接,质粒的终止子一侧应选用与W基因右

侧相同的HindⅢ,故切割质粒可选的限制酶为MfeⅠ、HindⅢ。图3中选用MfeⅠ会破

坏W基因,故只能选择同尾酶EcoRⅠ,因此选用EcoRⅠ、HindⅢ切割图3中的DNA。;典例1双酶切的作用

(2024全国甲,38节选)某同学采用基因工程技术在大肠杆菌中表达蛋白E。回答下列问题。

(1)该同学利用PCR扩增目的基因。PCR的每次循环包括变性、复性、延伸3个阶段,其

中DNA双链打开成为单链的阶段是????。

(2)质粒载体上有限制酶a、b、c的酶切位点,限制酶的切割位点如图所示。构建重组质

粒时,与用酶a单酶切相比,用酶a和酶b双酶切的优点体现在????

????(答出2点即可);使用酶c单酶切构建重组质粒时宜选用的连

接酶是????。;(3)将重组质粒转入大肠杆菌前,通常先将受体细胞处理成感受态,感受态细胞的特点是

????。若要验证转化的大肠杆菌中含有重组质粒,简要的实验思路

和预期结果是。;解析????(1)PCR过程中,变性是通过高温破坏碱基之间的氢键,使双链DNA解聚为单