颈动脉灌注操作流程.docxVIP

第一阶段：动物准备与麻醉

实验动物准备：健康成年大鼠，实验前禁食12小时（自由饮水）以减少麻醉风险。

麻醉：

诱导麻醉：使用异氟烷吸入麻醉或腹腔注射乌拉坦/戊巴比妥钠。

维持麻醉：在整个手术过程中，通过鼻锥或面罩持续提供异氟烷，或根据需要追加注射麻醉，以确保动物无疼痛反射（如夹捏后肢无反应）。

固定：将麻醉稳定的大鼠以仰卧位固定在手术板上，用胶带固定四肢。门齿可套上线绳以拉直颈部。

备皮与消毒：使用电动剃毛器或脱毛膏清除颈前区域的毛发。用碘伏和75%酒精对手术区域进行交替消毒2-3遍。

第二阶段：颈动脉分离手术

切口：用手术剪或手术刀在颈部正中线（从下颌骨下方到胸骨上缘）作一约2-3厘米的纵向切口。

分离皮下组织：用钝头手术镊或血管钳，沿颈正中线逐层分离皮下组织和唾液腺，暴露下方的肌肉层。

暴露颈动脉血管束：在气管两侧，可见被胸骨舌骨肌和胸骨乳突肌覆盖的颈动脉血管束。用钝头弯镊小心地沿肌肉缝隙分离，将肌肉向两侧拉开，即可看到包裹在鞘膜内的颈动脉、迷走神经和颈静脉。

颈动脉：位置较深，搏动明显，呈鲜红色。

迷走神经：呈白色，常与颈动脉紧密伴行。

颈静脉：位置较浅，管壁薄，呈暗红色，无搏动。

游离颈动脉：在显微镜或放大镜下，用精细的显微镊和剪刀，小心地撕开颈动脉鞘膜。用弯镊从动脉下方穿过，轻柔地将颈动脉与周围的迷走神经和脂肪组织分离开来，游离出约1-1.5厘米的长度。

关键：操作务必轻柔，避免损伤迷走神经，否则会影响动物的呼吸和心率。

第三阶段：颈动脉插管

这是整个操作的核心步骤，要求精准快速。

结扎远心端：用手术线在颈动脉的远心端（朝向头部方向）进行永久性结扎。

阻断近心端：用动脉夹或活结在颈动脉的近心端（朝向心脏方向）进行临时阻断。

插管准备：

导管：使用充满肝素生理盐水（50U/mL）的PE管（如PE-50）。

排气与抗凝：确保导管内无气泡，且肝素盐水已充满整个导管，防止血液凝固。

“V”形切口与插管：

在结扎点和动脉夹之间的动脉壁上，用显微剪刀剪一个约血管直径1/3-1/2的“V”形小口。

将准备好的导管尖端，沿向心方向插入颈动脉。

插入深度：约0.5-1厘米，确保尖端在动脉腔内且固定牢固。

固定导管：

用之前预留的线，将导管与颈动脉近心端一起结扎固定。

再将此结扎线与导管进行第二次结扎，形成双重保险。

小心移除近心端的动脉夹。此时应看到血液有少量回流入导管，并立即用肝素盐水轻轻推注，防止回流血液凝固。

第四阶段：灌注操作（根据实验目的选择）

A.活体灌注（用于给药/采血）

连接与冲洗：将导管连接到三通阀上。一路连接充满肝素盐水的注射器，用于定期冲洗管道；另一路连接含药液的注射器或压力传感器。

给药：通过三通阀将药路接通，以恒定速度推注药物。

采血/测压：

采血：关闭盐水路，用空注射器从导管中回抽所需量的血液，然后立即用肝素盐水冲洗管道。

测压：将导管通过三通阀连接到生物信号采集系统的压力传感器上，即可实时记录动脉血压。

B.终点灌流固定（用于组织学取材）

此操作在动物深度麻醉下进行，目的是用固定液替换血液循环，以完美保存组织形态。

灌注系统准备：

准备生理盐水和4%多聚甲醛磷酸缓冲液（或其他固定液）。

将灌注瓶悬挂于距动物心脏约1-1.2米的高度（产生约80-120mmHg的灌注压）。

管路中充满液体并排气。

开胸与插管：

快速打开胸腔，剪开膈肌和心包膜，暴露心脏。

用灌流针（或钝头针头）从左心室心尖部插入，穿过主动脉瓣，进入升主动脉。用动脉夹将针头固定在心脏上。

在右心耳剪开一个小口，作为灌注液的流出道。

灌注过程：

快速灌注生理盐水：打开生理盐水管路，以快速流速灌注，直到从右心耳流出的液体基本无血色（约150-200mL）。动物肝脏会迅速变白。此步骤旨在冲净血液。

慢速灌注固定液：切换至4%多聚甲醛管路，以较慢流速灌注（约100-150mL）。动物躯干和四肢会迅速变得僵硬、强直。此过程约持续15-20分钟。

取材：灌流固定完成后，即可取出目标组织（如脑、脊髓），并置于4%多聚甲醛中进行后固定。

第五阶段：术后护理与善后

仅针对活体实验：缝合颈部皮肤切口，将导管妥善固定在皮下或引出体外。动物苏醒后单独饲养，注意保温，给予analgesia（镇痛药）。

实验终点：所有操作结束后，在动物仍处于深度麻醉状态下，采用过量麻醉药或断头等方式实施安乐死。

关键注意事项

无菌操作：尽管是急性实验，也应尽可能保持无菌，减少感染对实验结果的影响。

抗凝：活体实验中，导管内必须充分肝素化，并定期冲洗，严防血栓形成。

轻柔操作：分离血管和神经时动作要精细，避免拉扯、损伤血管内膜或神经。

排气：任何注入血管的液体都必须严格排气，防止空气栓塞。

麻醉深度：时刻监控动物的麻醉状态和生命体征，确保动物无痛苦。

伦理与规范：所有操作必须遵循