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桂鱼血清IgM的分离纯化与鉴定方法研究

目录

内容概要．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．2

1.1研究背景与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．2

1.1.1免疫系统研究现状．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5

1.1.2桂鱼养殖与免疫学研究价值．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．6

1.2国内外研究进展．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．7

1.2.1确认性抗体研究概况．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．11

1.2.2不同鱼类免疫球蛋白研究比较．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．12

1.3本研究的目的与内容．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．15

1.3.1主要研究目标．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．16

1.3.2具体研究内容．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．17

实验材料与方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．19

2.1实验材料．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．20

2.1.1实验动物与样本来源．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．23

2.1.2主要试剂与仪器．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．23

2.2实验方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．24

2.2.1样本采集与处理．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．24

2.2.2血清制备与保存．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．25

2.2.3桂鱼血清免疫球蛋白M的初步分离．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．27

2.2.4免疫球蛋白M的进一步纯化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．29

2.2.5纯化蛋白的鉴定与分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．30

结果与分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．32

3.1桂鱼血清免疫球蛋白M的初步分离结果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．34

3.1.1确认性抗体纯化效果评估．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．36

3.1.2初步分离产物鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．39

3.2免疫球蛋白M的进一步纯化效果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．41

3.2.1高效纯化产物纯度分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．43

3.2.2纯化条件优化结果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．44

3.3纯化免疫球蛋白M的鉴定结果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．48

3.3.1结构特征分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．48

3.3.2功能活性验证．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．50

3.4讨论与比较．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．52

3.4.1本研究结果的生物学意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．54

3.4.2与其他鱼类免疫球蛋白M研究的比较．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．56

结论与展望．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．58

4.1主要研究结论．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．59

4.2研究不足与展望．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．62

1.内容概要

本研究旨在开展桂鱼血清免疫球蛋白(M)的分离纯化与鉴定，进而系统评价其在鱼类免疫应答中的特点及功能。研究主要分为以下几个关键步骤：

（1）血清采集与初步纯化

将一定体重和体况标准的