高中生物选修三章.pptVIP

第1页，共33页，星期日，2025年，2月5日基因工程别名操作环境操作对象操作水平基本过程目的基因拼接或DNA重组技术生物体外基因DNA分子水平剪切→拼接→导入→表达定向的改造生物的遗传性状基因工程定向的改造生物的遗传性状,这种变异来源是基因重组对基因工程(DNA重组技术)概念的理解？第2页，共33页，星期日，2025年，2月5日DNA重组技术的基本工具★手术刀(基因的剪刀)------准确切割DNA★缝合针(基因的针线)-----将DNA片段再连接起来★运输工具(基因的运载体)------将体外重组好的DNA导入受体细胞第3页，共33页，星期日，2025年，2月5日一.分子手术刀------限制性核酸内切酶(限制酶)A.来源:主要从原核生物中分离纯化B.作用:识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列,并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开.第4页，共33页，星期日，2025年，2月5日限制酶切割DNA后形成的末端——黏性末端、平末端是如何形成的？第5页，共33页，星期日，2025年，2月5日C.识别序列的组成:大多数由六个核苷酸组成D.切割后产生的DNA片段末端的形式黏性末端平末端反向对称重复排列第6页，共33页，星期日，2025年，2月5日二.DNA连接酶-------“分子缝合针”分类E.coliDNA连接酶T4DNA连接酶差别:E.coliDNA连接酶只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间连接起来;T4DNA连接酶既可以“缝合”双链DNA片段互补的黏性末端,又可以“缝合”双链DNA片段的平末端,但连接平末端之间的效率比较低.DNA连接酶与DNA聚合酶区别：第7页，共33页，星期日，2025年，2月5日DNA连接酶DNA聚合酶连接DNA链连接部位相同点双链单链在两DNA片段之间形成磷酸二酯键将单个核苷酸加到已存在的DNA片段上,形成磷酸二酯键都能形成磷酸二酯键，二者都由蛋白质构成第8页，共33页，星期日，2025年，2月5日基因的载体——“分子运输车”A.载体必须具备的条件：1、能够在宿主细胞中复制并稳定地保存；2、具有一个多个限制酶切点，以便与外源基因连接；3、具有某些标记基因，便于进行筛选。（如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等）4、对受体细胞无害，且大小要合适B.载体的作用：1、将外源基因转移到受体细胞中去。2、利用运载体在受体细胞内，对外源基因进行大量复制。C.常用的载体有：质粒，λ噬菌体的衍生物，动植物病毒等第9页，共33页，星期日，2025年，2月5日基因工程的基本操作程序目的基因的获取基因表达载体的构建将目的基因导入受体细胞目的基因的检测与鉴定第10页，共33页，星期日，2025年，2月5日一、目的基因的获取(一)、目的基因主要是______________________编码蛋白质的基因（二）、获取目的基因的常用方法有哪些?1、从基因文库中获取2、利用PCR技术扩增3、人工合成第11页，共33页，星期日，2025年，2月5日一、目的基因的获取（一）从基因文库中直接获取1.基因文库：概念见P92.基因文库的分类:按外源DNA片段的来源分类种类基因组DNA文库：含有一种生物的全部基因部分基因文库：只包含了一种生物的部分基因，如：cDNA文库3.基因文库的目的为了在不知目的基因序列的情况下，便于获得所需的目的基因4.获取目的基因的根据：见课本P9第12页，共33页，星期日，2025年，2月5日（一）基因文库的构建（1）基因组文库的构建提取某生物全部DNA用适当限制酶切割许多DNA片段与载体连接导入受体菌群该生物基因组文库（每个受体菌含有一段不同的DNA片段）（2）cDNA文库的构建——mRNA反转录形成与载体连接导入受体菌群mRNA逆转录酶杂交双链核酸酶H单链DNADNA聚合酶双链DNA(cDNA)该生物cDNA文库第13页，共33页，星期日，2025年，2月5日1、概念：PCR全称为_______________，是一项在生物____复制___________的核酸合成技术通过这项技术可在短时间内大量扩增目的基因因为整个过程是在体外进行，所以又叫做体外DNA扩增技术。多聚酶链式反应体外特定DNA片段