医用消毒型超声耦合剂体外细胞毒性检测的探讨.pdfVIP

第4卷第16期技术探讨

2014年6月CONSTRUCTION

医用消毒型超声耦合剂体外细胞毒性检测的探讨

王莎莎高静贤金梦严小莉

江苏省医疗器械检验所江苏南京210022

摘要：应用MTT比色法和琼脂扩散法检测医用消毒型超声耦合剂的体外细胞毒性。用MTT比色法检测时，同一浸提液在细胞接种密度高

时，显示出的毒性级别低，反之亦然。同一试验材料采用琼脂扩散法检测时的结果与MTT比色法有区别。由于MTT比色法具有定量评价的优点，

更适合耦合剂产品的体外细胞毒性检测。但是由于消毒型耦合剂含有消毒剂成份，在评价其毒性时应充分考虑到消毒剂对细胞的毒性作用，明确

试验条件和浸提液制备方法。建议进一步完善医用超声耦合剂产品的体外细胞毒性检测方法。

关键词：医用消毒型超声耦合剂；细胞毒性；琼脂扩散法；MTT比色法

中图分类号：R187 文献标识码：A

医用超声耦合剂发端于西方发达国家，是超声诊断与治疗操作growthrare，RGR）：RGR=实验组吸光度值／对照组吸光度值

中的专用制剂，然而，迄今为止国际组织和发达国家均不曾制定×100％，并判定细胞毒性级别。

过相应的技术标准[1]。为了确保其符合安全、有效的原则，第一版于更换培养液后的72h将细胞接种密度为104个的培养板取出

的耦合剂行业标准由国家食品药品监督管理局于1998年颁布实施。重复以上MTT实验。

随着耦合剂产品的发展，除了用于完好皮肤的普通型制剂外，还出1.2.2琼脂扩散法

现了无菌型及消毒型等类型的产品。2010颁布实施的新版医用超将培养至近汇合的细胞稀释成2.5×105U/mL接种于6孔培养板

声耦合剂标准（YY0299—2008）对该类产品的生物相容性提出了中，设阴性对照组、阳性对照组及样品组，每组设3个平行样，各

要求。标准中要求按照GB/T16886.5-2003中规定的直接接触法进孔加入2mL，放于CO2培养箱中培养至近汇合状态。将溶化的琼脂

[2]

行试验，在短时间（24h以内）接触条件下，产品应无细胞毒性。培养基与2倍浓缩的含10％血清的RPMI1640培养基等比混合制成

细胞毒性试验作为评价材料毒性的重要指标，以其简便、快捷、灵混合琼脂培养基，使琼脂的最终浓度为2％。弃去上清后每孔加入

敏性高、重现性好、节省动物，并且试验结果有一定的临床相关性2mL混合琼脂培养基，待琼脂层凝固后，分别加入2mL新鲜配制的

等优点被列为首选试验项目[3]。GB/T16886.5-2003中规定了3类试0.01%中性红活体染色剂，置于暗处染色20min后取出，吸除多余

验方法，即浸提液试验、直接接触试验以及间接接触试验（包括琼的染色剂，分别取无菌型及消毒型医用超声耦合剂均匀涂布于无菌

脂覆盖法和滤膜扩散法）[4，5]。ISO10993-5：2009标准的附录C规滤纸片上并放置于固化的琼脂层上，样品约覆盖细胞层表面十分

定了MTT法检测细胞毒性的试验步骤。本试验选取了消毒型超声之一，阴性对照选用直径约5mm、厚约2mm的高密度聚乙烯圆片，

耦合剂，在不同的试验条件下采用MTT法以及间接接触法中的琼阳性对照选用直径约5mm用20％苯酚溶液浸湿的医用明胶海绵，

脂覆盖法对其进行细胞毒性评价，以探讨