半薄切片技术介绍.pptVIP

第1页，共18页，星期日，2025年，2月5日半薄切片图片第2页，共18页，星期日，2025年，2月5日钙化骨组织切片眼球附近组织的连续切片第3页，共18页，星期日，2025年，2月5日半薄切片：(厚度为0.5μm～1μm)

第4页，共18页，星期日，2025年，2月5日半薄切片进行光学显微镜观察的目的：①可以根据半薄切片精确定位。②了解样品包埋质量，以确定是否继续做超薄切片；③与石蜡切片、超薄切片进行对比研究第5页，共18页，星期日，2025年，2月5日半薄切片的优点：?克服了超薄切片的盲目性和电镜视野的局限性?清晰度、分辨率远优于石蜡切片，视野也大于超薄切片，有利于获得高质量的光镜图像?也是电镜超薄切片技术中一种有效的定位方法。第6页，共18页，星期日，2025年，2月5日电镜超薄技术中如何应用呢？电镜是观察组织细胞超微结构的一种手段。但由于切片太小，有时难于观察到目标结构，为此需大量制备样品，造成工作量大且消耗多。为使超薄切片能精确地切到目标部位，在做超薄切片前要做半薄切片来进行定位。第7页，共18页，星期日，2025年，2月5日应用：胚胎学，病理学，动植物细胞学研究中一种普遍的切片方式第8页，共18页，星期日，2025年，2月5日半薄切片主要步骤★取材★固定★漂洗、脱水★渗透、包埋★半薄切片★半薄切片染色每一步都是关键,任何环节的疏忽都会导致制片的失败第9页，共18页，星期日，2025年，2月5日FAA固定液制备：福尔马林5-冰醋酸5-70%酒精90应用：半薄/石蜡切片适用：一般固定根、茎、叶、花药、子房组织切片。补充说明：幼嫩材料用50%酒精代替70%酒精，防止材料收缩；加入5%甘油可防固定液蒸发和材料变硬。第10页，共18页，星期日，2025年，2月5日卡诺固定液12纯酒精15ml30ml氯仿5ml冰醋酸5ml1ml渗透迅速，固定根尖和花药只需30-60分钟，但固定时间不能太久，一般不超过一天第11页，共18页，星期日，2025年，2月5日LeicaRM2265旋转薄切片机第12页，共18页，星期日，2025年，2月5日LeicaRM2265旋转薄切片机制作半薄切片（厚度0.25-5μm）使用步骤：1．接通电源，打开主开关2．选择切片厚度3．安放包埋块于切片头中央位置，旋转固定螺丝，将样品按要求固定挟紧4．安放粘有水槽的玻璃刀，并将玻璃刀口对准样品5．选择切片模式（自动/手动）， 切片计数开始6．取切片的材料：捞片，置于载玻片上，加热，脱树脂处理，对材料染色，着色后冲洗、封藏、烘干第13页，共18页，星期日，2025年，2月5日