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空气培养方法

空气作为微生物传播的重要媒介，其卫生质量直接关系到生产环境安全、产品质量乃至人体健康。空气培养，即通过特定方法捕获并培养空气中的微生物，进而对其种类和数量进行分析，是评估空气质量、追踪污染源、制定防控措施的基础手段。本文将系统介绍空气培养的基本原理、常用方法、操作流程及结果判读要点，旨在为相关领域的实践工作提供专业指导。

一、空气培养的基本原理与意义

空气中的微生物主要以气溶胶形式存在，即微生物个体或其聚集体附着在尘埃颗粒、液滴上，悬浮于空气中。空气培养的核心原理在于利用特定的采样技术，将这些微生物气溶胶有效地收集到合适的培养基上，然后在适宜的条件下培养，使其形成肉眼可见的菌落，从而实现对空气中活菌数量和种类的检测。

其主要意义体现在：首先，在医疗卫生领域，手术室、ICU、洁净病房等关键区域的空气微生物监测是预防院内感染的重要环节；其次，在食品加工、制药、化妆品等行业，空气洁净度是保证产品质量、防止微生物污染的关键指标；此外，在科研实验、生物安全以及特定环境（如生物实验室、发酵车间）的管理中，空气培养也扮演着不可或缺的角色。

二、空气微生物采样方法概述

目前，空气微生物采样方法多样，各有其适用场景和优缺点。实际操作中需根据监测目的、环境特点及对结果的要求进行选择。

（一）自然沉降法

自然沉降法，亦称平板暴露法，是最经典、操作最简单的空气微生物采样方法。其原理基于重力作用，让空气中的微生物气溶胶颗粒自然沉降到置于采样点的、含有适宜培养基的平皿表面。该方法操作简便，无需特殊仪器，成本低廉，适用于一般环境的初步筛查或大面积普查。然而，其采样效率受气流、温度、颗粒大小等因素影响较大，主要捕获较大颗粒的微生物，对小颗粒气溶胶的捕获效率相对较低，结果的定量准确性也有一定局限。

（二）撞击法

撞击法是利用抽气装置产生气流，使含微生物的空气高速通过狭小的喷嘴或狭缝，直接撞击到固体培养基表面或含有吸收液的采样管中，从而将微生物截留下来。常见的有安德森采样器（分级撞击式）、裂隙式采样器等。撞击法的优点是采样效率较高，尤其是对小颗粒微生物气溶胶的捕获能力强，且能较准确地反映单位体积空气中的微生物浓度，是目前应用较为广泛的定量采样方法。但其操作相对复杂，需要专用仪器，成本也较高。

三、主要设备与材料准备

无论采用何种方法，实验的成功与否很大程度上取决于前期准备工作的细致程度。

（一）培养基

选择合适的培养基是关键。通用的营养琼脂（NA）可用于培养大多数需氧和兼性厌氧的细菌；若需分离真菌（霉菌和酵母菌），则常用马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）或沙氏葡萄糖琼脂（SDA），并可根据需要添加抗生素（如氯霉素）以抑制细菌生长。培养基的制备、灭菌、倒平板等操作均需严格遵循无菌操作规范，确保培养基质量合格，无杂菌污染。

（二）采样器具

*自然沉降法：主要为培养皿（平皿），通常直径为90mm。

*撞击法：相应的采样器（如安德森采样器、空气采样泵等）、采样头、无菌采样管（若使用液体吸收）等。

*此外，还需备有酒精灯、标记笔、灭菌镊子、试管架、计时器、温湿度计等。

（三）培养设备

恒温培养箱，根据目标微生物的最适生长温度进行设定，如一般细菌常用35-37℃，真菌常用25-28℃。

（四）灭菌设备

高压蒸汽灭菌器用于培养基、采样器具（除部分不耐热塑料件外）的灭菌；超净工作台用于无菌操作。

四、操作步骤详解

以应用最为广泛的自然沉降法和撞击法为例，详细说明操作流程。

（一）自然沉降法操作流程

1.采样点选择与布点：根据监测目的和环境特点，合理设置采样点。通常选择在房间的对角线或梅花状分布，避开通风口、墙角、障碍物及人员频繁走动区域。采样点高度一般与呼吸带高度一致，或根据需要设定。记录采样环境的温度、湿度、采样日期和时间、采样地点等信息。

2.样品准备：在超净工作台内或无菌环境下，标记培养皿（注明采样点、日期、时间等）。

3.采样操作：采样人员穿戴好无菌工作服、口罩、手套。将准备好的培养皿带至采样点，在无菌操作下（如靠近酒精灯火焰）打开皿盖，使培养基表面暴露于空气中。同时开始计时，暴露规定时间（通常为15分钟或30分钟，具体可根据环境洁净度要求和标准方法确定）。暴露期间，采样人员应远离采样点，避免人为干扰气流。

4.采样结束：达到规定时间后，迅速盖好皿盖，再次核对标记。

5.培养：尽快将采样后的培养皿送回实验室，倒置放入相应温度的恒温培养箱中培养。细菌培养48小时左右，真菌培养5-7天，具体培养时间可根据观察到的菌落生长情况适当调整。

（二）撞击法操作流程（以固体培养基撞击采样为例）

1.采样点选择与布点：同自然沉降法。

2.仪器与样品准备：检查采样器是否完好，电池电量（若为便携式）是否充足。在超净工作台内，将灭菌的培养基