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穴位埋线、中药对慢性肾功能衰竭大鼠

PTH及TGF-β1的影响

陈坤支师晶丽吕明庄贺志光覃仁安

(1.贵阳市妇幼保健院儿童医院中医科,贵州550003;2.中山大学第五附属医院中医科;3.贵阳医学院)

[摘要]目的:探讨足三里穴位埋线、中药治疗慢性肾衰(CRF)的作用机制。方法:Platt肾大部切除法诱导CRF模型大鼠,然后分5组:假手术组、模型组、中药组、埋线组、埋线加中药组。治疗8w后,测定血清甲状旁腺素(PTH)、残肾组织细胞转化生长因子β1(TGF-β1)的表达、残肾组织丙二醛(MDA)含量、血清尿素氮(BUN)、肌酣(Scr)、尿蛋白及病理改变情况。结果:经穴位埋线、中药及穴位埋线加中药治疗后的CRF模型大鼠的上述指标呈良性转逆,特别是以穴位埋线加中药组疗效最明显。结论:穴位埋线和中药改善CRF的作用机制与降低PTH、抑制TGF-β1的表达、降低MDA含量、阻止肾脏纤维化病变有关。

[主题词]肾功能衰竭/穴位疗法;穴位埋线结扎;甲状旁腺素/代谢;转化生长因子/代谢

慢性肾衰竭(chronicrenalailure,CRF)简称慢性肾衰,会导致继发性甲状旁腺素(parathyroidhormone,PTH)分泌增多,PTH也是促进CRF进展的重要因子,成为一种新型的尿毒症毒素。转化生长因子β1(TGF-β1)可促进肾脏疾病的发展,导致肾组织纤维化。对抗TGF-β1的作用以阻止肾脏纤维化,阻止肾小球、小管疾病,延缓CRF进展有重要意义。

中药对慢性肾衰PTH和TGF-β1影响的实验仅见少量报道,特别是针灸疗法对CRF大鼠PTH和TGF-β1影响的报道更是鲜见。所以针灸、中药在治疗CRF机制中是否有对PTH及TGF-β1的影响环节的参与,目前可作为针灸、中药治疗CRF研究的方向之一。为此笔者做了这方面的动

物实验观察。

1材料与方法

1.1实验动物、造模及分组

选取体重(200±20)g健康Wistar雄性大鼠75只(广东第一军医大学实验动物中心提供,粤检证字第2003A041号),喂养观察1w后开始实验。置代谢笼中饲养,测定尿蛋白(在1.20~6.20mg/L之间)均示无蛋白尿。随机抽出65只行5/6肾大部切除法(两期手术)建立CRF大鼠模型。其余10只作为假手术组:暴露肾脏后,只剥离肾包膜,不做肾脏切除。

切除之肾组织称重,以右肾重量减去所切除的左肾重量来间接估算残余肾重量,并算出切除率。本次实验组肾脏平均切除率为(78±3)%。

二期手术后喂养12w,尾部取血测血清尿素氮(BUN)、肌酣(Scr),结果参考河北省医学科学院实验室观察Wistar大鼠CRF临界值:BUN≥24.0mg/dL(正常值815mmol/L)、Scr≥1.4mg/dL(正常值123.8μmol/L);随机抽出手术模型组大鼠15只和假手术组2只处死取残肾作病理HE、PASM、Masson染色。病理切片提示肾小球肥大、滤过膜增厚、肾小球和肾间质纤维化、肾小管扩张、管内有蛋白沉积,即说明CRF模型造模

成功。

CRF造模成功后,再将存活的大鼠随机分为4组,即:模型组、中药组、埋线组、埋线加中药组,每组7只(为了比较均衡,使各组间的样本数一致,假手术组也取7只)。

1.2治疗方法

(1)穴位埋线组行穴位埋线法。将用3%戊巴比妥钠麻醉的大鼠,俯卧固定,外展位拉直后肢,经已预先置入4-0号0.5cm长无菌羊肠线的7号针头,于水平方向埋入已经常规消毒后的“足三里”穴(每次所有大鼠均取同一侧),埋线治疗4w1次,左右交替,共2次(8w)。

(2)中药组给大鼠灌服中药。中药制剂:黄芪、川芎、大黄分别用超临界CO2工艺提取(CO2-SFE),然后再予成分配伍制成,1g中药提取物相当于原生药20g,按011g/200g体重给药。每日1次,连续8w。

埋线加中药组方法同上2组。假手术组和模型组灌服等容积生理盐水。

1.3指标测定及方法

治疗中第4w、第8w尾部取血监测BUN、Scr,收集24h尿测尿蛋白。

末次灌胃并禁食12h后,采血测BUN、Scr及PTH。PTH含量采用竞争性放射免疫分析法测定。取血后,迅速解剖摘取残肾并精确称重,将其分成2份,一份制成10%的肾组织匀浆做丙二醛(MDA)测定;另一份放入中性福尔马林液固定,脱水、石蜡包埋、常规切片,观察残肾组织细胞TGF-β1因子的表达(采用SABC免疫组化染色法)。TGF-β1免疫组化半定量分析:采用计算机Mias多媒体彩色病理图像分析系统检测阳性细胞表达的平均光密度值。残肾组织MDA含量用硫代巴比妥酸(TBA)法测定。

2结果

2.1各组大鼠在干预治疗4w、8w时血清Scr、BUN及24h尿蛋白水平比较除假手术组外,各组大鼠Scr、BUN第4w、第8w均呈进行性上升,但