《食品生物技术》第四章酶分子修饰_酶工程.pdfVIP

Chapter4Modificationof

EnzymeMolecule

酶的分子修饰

Contentsofchapter4

Go1、什么是酶分子修饰

Go2、酶分子修饰的基本要求和条件

Go3、酶分子的修饰方法

Go4、酶修饰后的性质变化

Go5、酶的定向化

4.1什么是酶分子修饰？

o通过各种方法使酶分子的结构发生某些改变，从改变

酶的某些特性和功能的技术过程称为酶分子修饰。即：

在体外将酶分子通过人工的方法与一些化学基团（物

质），特别是具有生物相容性的物质，进行共价连接，

从改变酶的结构和性质。

酶分子修饰的意义

o提高酶的活力activity

o增强酶的稳定性stability

o降低或消除酶的抗原性immunologicalproperty

o研究和了解酶分子中主链、侧链、组成单位、金属离子

和各种物理因素对酶分子空间构象的影响structure

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4.3酶分子的修饰方法

o金属离子置换修饰,

o大分子结合修饰(共价/非共价)

o侧链基团修饰

o肽链有限水解修饰

o氨基酸置换修饰

o酶分子的物理修饰

(1)酶的金属离子置换修饰

o把酶分子中的金属离子换成另一种金属离子，使酶的特性和功能

发生改变的修饰方法称为金属离子置换修饰。

2+2+

oα-淀粉酶中的钙离子（Ca），谷氨酸脱氢酶中的锌离子(Zn)，

2+

过氧化氢酶分子中的铁离子(Fe)，酰基氨基酸酶分子中的锌离子

2+2+2+

（Zn）,超氧化物歧化酶分子中的铜、锌离子(Cu,Zn)

o若从酶分子中除去其所含的金属离子，酶往往会丧失其催化活性。

如果重新加入原有的金属离子，酶的催化活性可以恢复或者部分

恢复。若用另一种金属离子进行置换，则可使酶呈现出不同的特

性。有的可以使酶的活性降低甚至丧失，有的却可以使酶的活力

提高或者增加酶的稳定性。

金属离子置换修饰的过程

pa.酶的分离纯化：首先将欲进行修饰的酶经过分离纯化，除去杂质，获

得具有一定纯度的酶液。

pb.除去原有的金属离子：在经过纯化的酶液中加入一定量的金属螯合剂，

如乙二胺四乙酸（EDTA）等，使酶分子中的金属离子与EDTA等形成螯合物。

通过透析、超滤、分子筛层析等方法，将EDTA-金属螯合物从酶液中除去。

此时，酶往往成为无活性状态。

pc.加入置换离子：于去离子的酶液中加入一定量的另一种金属离子，酶

蛋白与新加入的金属离子结合，除去多余的置换离子，就可以得到经过金属

离子置换后的酶。

p金属离子置换修饰只适用于那些在分子结构中本来含有金属离子的酶。

p用于金属离子置换修饰的金属离子，一般都是二价金属离子。

(2)酶的大分子修饰

非共价修饰

o使用一些能与酶非共价地相互作用又能有效地保护酶的一些添加

物，如聚乙二醇、右旋糖苷等，它们既能通过氢键固定在酶分子表

面，也能通过氢键有效地与外部水相连，从保护酶的活力。

o一些添加物，如多元醇、多糖、多聚氨基酸、多胺等能通过调节酶

的微环境来保护酶的活力。

o另一类添加物就是蛋白质。蛋白质分子之间相互作用时，其表面区

域内排除了水分子，因增加了相互作用力，其稳定性也就增加了。

共价修饰

o用可溶性大分子，如聚乙二醇、右旋糖苷、肝素等，通过共价键

连接于酶分子的表面，形成一层覆盖层。

o例如：用聚乙二醇修饰