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试卷《第二章第4节+甲型肝炎和戊型肝炎实验室检测》

甲型肝炎（hepatitisA，HA，简称甲肝）和戊型肝炎（hepatitisE，HE，简称戊肝）分别是由甲型肝炎病毒（hepatitisAvirus，HAV）和戊型肝炎病毒（hepatitisEvirus，HEV）引起的，以肝脏炎症病变为主的急性传染病，主要经粪口途径传播。实验室检测在甲肝和戊肝的诊断、病情监测及流行病学调查等方面起着至关重要的作用。以下将详细介绍甲肝和戊肝的实验室检测相关内容。

标本的采集与处理

血液标本

血液标本是甲肝和戊肝实验室检测最常用的标本。对于甲肝和戊肝疑似患者，一般采集静脉血。通常采用无菌技术，使用真空采血针采集35ml静脉血于干燥无抗凝剂的采血管中。采血后，应将标本室温放置一段时间，待血液自然凝固，然后以3000r/min离心1015分钟，分离出血清。分离后的血清应尽快进行检测，若不能及时检测，需将血清分装后于20℃或70℃保存，避免反复冻融，因为反复冻融会破坏病毒抗原和抗体的结构，影响检测结果的准确性。

粪便标本

对于甲肝和戊肝病毒的检测，粪便标本也具有重要意义，特别是在病毒排毒期的检测。采集粪便标本时，应使用无菌容器，取新鲜粪便510g。粪便标本中含有大量的杂质和微生物，需要进行预处理。通常将粪便标本用PBS（磷酸盐缓冲液）按1:101:20的比例稀释，充分振荡混匀后，以30005000r/min离心1520分钟，取上清液用于后续检测。上清液同样可以根据检测时间安排进行保存，短期可4℃保存，长期需70℃保存。

其他标本

在某些特殊情况下，如进行病毒的组织分布研究等，还可能会采集肝组织、胆汁等标本。肝组织标本的采集一般在特殊的临床研究或尸检时进行，采集后需立即进行处理，常用固定液固定后用于病理检查或分子生物学检测。胆汁标本可通过穿刺等方式获取，采集后也需及时处理和检测或保存。

甲型肝炎实验室检测

病毒抗原检测

1.检测原理

HAV是一种微小RNA病毒，病毒抗原检测主要是检测病毒颗粒或其组成成分。在感染早期，血液和粪便中可能存在HAV抗原，通过检测这些抗原可以早期诊断甲肝。常用的检测方法有免疫电镜（IEM）和酶联免疫吸附试验（ELISA）等。

2.免疫电镜（IEM）

免疫电镜是一种较为直观的检测方法。其原理是利用特异性抗体与HAV抗原结合，在电子显微镜下观察到抗原抗体复合物。具体操作时，将患者的粪便标本或其他含病毒的样本与抗HAV抗体混合，使抗体与病毒抗原结合形成复合物，然后通过负染技术在电子显微镜下观察。该方法可以直接观察到HAV病毒颗粒的形态和结构，对于病毒的鉴定具有重要价值。然而，免疫电镜需要昂贵的设备和专业的技术人员，且操作复杂、灵敏度相对较低，一般只在科研或特殊情况下使用。

3.酶联免疫吸附试验（ELISA）

ELISA是目前检测HAV抗原常用的方法。其基本原理是将抗HAV抗体包被在固相载体（如聚苯乙烯微孔板）上，加入待检样本，若样本中存在HAV抗原，抗原会与包被抗体结合，再加入酶标记的抗HAV抗体，形成抗体抗原酶标抗体复合物，最后加入底物显色，通过检测吸光度值来判断样本中HAV抗原的存在与否。该方法具有操作简便、灵敏度较高、特异性强等优点，广泛应用于临床实验室。

抗体检测

1.抗HAVIgM检测

抗HAVIgM是甲肝近期感染的重要标志物。在甲肝感染后数天即可在血清中检测到抗HAVIgM，一般持续36个月。检测方法同样常用ELISA。将抗人IgM抗体包被在固相载体上，捕获待检血清中的抗HAVIgM，再加入酶标记的HAV抗原，通过酶催化底物显色来检测抗HAVIgM的存在。检测结果阳性提示近期感染HAV，对甲肝的早期诊断具有重要意义。

2.抗HAVIgG检测

抗HAVIgG是机体感染HAV后产生的一种长期存在的抗体。它在感染后期出现，可终身存在，是既往感染HAV的标志。其检测原理与抗HAVIgM类似，也是通过ELISA方法。抗HAVIgG阳性表明曾经感染过HAV，或者接种过甲肝疫苗，具有一定的免疫力。

3.检测结果分析

抗HAVIgM阳性而抗HAVIgG阴性，提示急性甲肝感染；抗HAVIgM和抗HAVIgG均阳性，可能为甲肝急性期；若抗HAVIgM阴性而抗HAVIgG阳性，则提示既往感染或接种过疫苗。

核酸检测

1.检测原理

核酸检测主要是检测HAV的RNA。通过反转录聚合酶链反应（RTPCR）技术，先将HAV的RNA反转录为cDNA，然后进行PCR扩增，通过检测扩增产物来确定样本中是否存在HAV核酸。该方法具有灵敏度高、特异性强的特点，能够在感染早期检测到病毒核