基于滚环扩增和免疫化学发光的超敏Aβ检测平台构建及AD无创诊断研究.pdfVIP

优化，确定了最佳反应时间。

2.滚环扩增-免疫化学发光检测（RCA-CLIA）方法学的性能评价：分别对RCA-

CLIA方法学的线性范围、最低检测限、正确度、精密度、抗干扰性等方面进行

评价。

3.外周血Aβ42/Aβ40定量检测在AD无创诊断中的应用。

研究结果：

1.本研究成功建立了外周血Aβ42/Aβ40RCA-CLIA定量检测方法学，该方法学

的线性范围分别为3.9-180pg/mL（Aβ40）和3.9-140pg/mL（Aβ42）；其校准

2

曲线方程分别为RLU11710X+103118（Aβ40），R=0.9970和

2

RLU=14543X+76295（Aβ42），R=0.9967。最低检测限分别为3.14（Aβ40）和

1.99（Aβ42）。批内精密度分别为分别为1.87%、3.23%、8.73%（Aβ40）和1.40%、

3.53%、12.61%（Aβ42）。批间精密度分别为2.67%、3.74%、9.74%（Aβ40）

和2.67%、4.17%、14.13%（Aβ42）。正确度分别为98.65%（100pg/ml）、95.80%

（50pg/ml）、94.28%（25pg/ml）、94.40%（12.5pg/ml）（Aβ40）和108.90%

（100pg/ml）、109.88%（50pg/ml）、99.52%（25pg/ml）、95.44%（12.5pg/ml）（A

β42）。抗干扰结果分别为：Aβ40系统与不同浓度的Aβ42、APP无交叉反应，

Aβ42系统与不同浓度的Aβ40、APP无交叉反应。上述结果表明，RCA-CLIA

检测方法学具有灵敏度高、特异性好、精密度高、正确度高、重复性好等优点。

2.外周血Aβ42/Aβ40定量检测对AD无创诊断的研究。使用RCA-CLIA方法

定量检测21例AD患者和22例健康体检者外周血中Aβ42/Aβ40的浓度。结

果显示AD患者外周血Aβ40浓度无明显差异、Aβ42浓度明显降低，但后续

分析数据结果表明Aβ40单指标分析ROC曲线下面积为0.5130，Aβ42单指标

分析ROC曲线下面积为0.7208，两指标结合分析Aβ42/Aβ40的ROC曲线下

面积为0.8496，两指标结合可以更好的对AD患者和健康人进行区分。

结论：

本课题成功构建了基于RCA-CLIA检测外周血Aβ42/Aβ40的方法学，各

项方法学指标均可满足临床检测要求；初步临床试验结果表明，该方法对AD无

创诊断具有良好的应用前景。

关键词：阿尔茨海默症；RCA-CLIA；无创标志物；β-淀粉样蛋白；

UltrasensitiveDetectionofAβbyRollingCircleAmplification

ChemiluminescentImmunoassayforNoninvasiveDiagnosis

ofAlzheimer’sDisease

Background:

Alzheimer’sdisease(AD)isakindofneurodegenerativedisorderwithprogressive

memoryloss,cognitivedecline,andbehaviorchange.Manystudieshaveprovedthat

β-amyloid(Aβ)playsanimportantroleinthepathologicalprocessofAD.Over

depositionofAβandphosphorylationofTaucancauseextracellularsenileplaque(SP)

inthebrainandneurofibrillarytangles,leadingto