OsbHLH98通过抑制OsBUL1的转录调控水稻叶夹角.pdfVIP

4.2.1免疫沉淀（IP）分析52

4.2.2ChIP-seq和ChIP-qPCR分析53

4.2.3从ChIP-seq结果中得到的OsbHLH98结合候选基因在转基因株系中的表达量分析..54

4.2.4烟草中OsbHLH98对ProOsBUL-LUC转录调控分析以及烟草叶片的荧光成像54

4.3结果与讨论55

4.3.1免疫沉淀（IP）结果55

4.3.2ChIP-seq结果分析55

4.3.3候选OsbHLH98靶基因在各个转基因株系中的表达量59

4.3.4OsbHLH98可结合OsBUL1启动子60

4.3.5OsbHLH结合在OsBUL1启动子区域并抑制其表达62

4.3.6OsBUL1突变能够恢复osbhlh98突变体叶夹角增大表型64

第五章外源BR处理对OsbHLH98的突变体以及过表达株系叶夹角的影响67

5.1引言67

5.2材料与方法67

5.2.1材料67

5.2.2外源油菜素内酯（2,4-epiBL）处理离体叶枕67

5.2.3外源油菜素内酯对OsbHLH98以及OsBUL1表达量的影响68

5.2.4外源2,4-epiBL处理对OsbHLH98亚细胞定位以及对OsbHLH98-OsBUL1调控水平的影响。

68

5.3结果与讨论68

5.3.1外源BR处理不影响OsbHLH98的转录水平和蛋白水平68

5.3.2osbhlh98突变体对外源BR处理超敏感，而OsbHLH98过表达株系则对外源BR处理不敏

感69

5.3.3OsbHLH98限制外源BR诱导的OsBUL1的转录表达71

5.3.4外源BR不影响OsbHLH98在烟草中的亚细胞定位也不影响对OsBUL1的抑制效果..73

第六章结果与讨论78

6.1OsbHLH98编码一个bHLH家族转录因子78

6.2OsbHLH98的表达模式与其调控的表型相符合80

6.3OsbHLH98通过抑制OsBUL1的表达来影响叶夹角以及减缓植物对BR的响应80

6.4水稻叶夹角的多途径调控82

6.5OsbHLH98调控的叶夹角变化对农业生产应用的意义83

附录实验方法及补充数据85

附表1引物汇总以及载体构建策略85

本实验所用载体图谱86

水稻基因组DNA快速提取88

水稻基因组DNA的提取89

水稻总RNA提取及qRT-PCR90

cDNA第一链合成91

荧光定量PCR（qRT-PCR）91

农杆菌感受态EHA105的制备（CaCl2法）92

水稻转基因方法93

1水稻愈伤组织的诱导93

2诱导与继代培养93

3共培养和抗性愈伤组织的选择94

4抗性愈伤组织的诱导分化及生根培养94

5转基因苗的锻炼和移栽94

GUS染色相关试剂配制和染色方法95

BR敏感性测试95

ChIP操作方法96

CUTRUN操作方法100

烟草叶片瞬时表达105

烟草转化液配方106

参考文献107

攻读博士期间发表的文章114

致谢

年岁过往，来人过客，悟已往之不谏，知来者之可追。八年前，我与行李一起到达浙

江大学紫金港校区，怎么也悟不到我将在此度过一段挣扎徘徊