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我的课题顺利完成，在此再次由衷感谢。

感谢我的家人对我的支持、理解和包容。

最后，感谢评阅我博士论文和出席论文答辩的各位专家、教授，感谢各位老

师在百忙之中给予指导和关心。

于2021年3月浙江大学紫金港校区

LATS1在骨稳态平衡调节中的作用与机制研究

浙江大学医学院药理学

博士研究生渠美钰

导师吴希美教授

中文摘要

骨质疏松症（osteoporosis）是指机体骨密度下降、骨重构异常、骨组织微结

构破坏，且以骨脆性增加和易于骨折为主要临床表现的骨代谢疾病。骨质疏松患

者骨髓腔中破骨细胞数目明显增多。破骨细胞为多形核终末分化的髓系细胞，分

解矿物化的骨基质是其核心功能。因此，深入了解破骨细胞分化及作用机制对于

骨质疏松疾病的预防和治疗具有重要的意义。

保守的Hippo信号通路被认为是细胞命运、组织稳态、器官大小的决定因素，

NDR家族激酶LATS1/2（Largetumorsuppressorl/2）是Hippo信号通路中的关键

激酶，LATS1/2的活性高低直接决定了Hippo信号的开放或关闭，在组织稳态平

衡维持中具有重要角色。近年来已有大量研究报道显示Hippo信号通路与骨重构

密切相关，但LATS1在骨量维持中的作用尚不清楚。我们在比较正常人和绝经期

后骨质疏松妇女骨髓涂片样本时发现后者破骨细胞中p-LATS1的表达量显著高于

Sham组，提示LATS1可能参骨质疏松症的发生与发展。进一步我们通过遗传工

程小鼠揭示了LATS1在骨重构中扮演重要角色，并通过体外细胞学实验对其调控

机制作了初步的探讨。首先通过观察Lats1全敲（Lats1-/-）的转基因小鼠，发现与

对照小鼠相比，Lats1-/-小鼠的体型明显减小，骨密度异常增高。为了明确Lats1-/-

小鼠骨发育异常的原因，我们分离了Lats1-/-小鼠骨组织进行成骨与破骨分化标记

基因染色，结果提示Lats1-/-小鼠成骨与前破骨标记基因明显增多，但成熟破骨的

标记基因组织蛋白酶K（CaptehsinK，CTSK）明显减少，另外，在体外细胞学实

验上，我们分别检测了成骨分化基因与破骨分化标记基因的表达情况，并进行了

成骨分化的茜素红染色明确矿化物结节形成能力以及破骨分化的TRAP染色和骨

吸收能力，明确破骨分化潜能，结果均表明，Lats1基因敲除小鼠的骨重构异常是

由成骨分化能力增强，破骨骨吸收能力下调所引起的。

破骨细胞来源于单核-巨噬细胞系中的单核前体细胞，在巨噬细胞集落刺激因

子（marcrophage-colonystimulatingfactor，M-CSF）增殖形成前体破骨细胞，破骨

前体细胞进一步增殖融合形成多形核的巨细胞，即成熟破骨细胞。为了明确LATS1

对破骨细胞分化功能的调控作用，我们观察了在破骨前体细胞敲除Lats1（Rank-Cre;

Lats1f/f）和破骨细胞中敲除Lats1（Ctsk-Cre;Lats1f/f）对破骨细胞功能的影响，发

现敲除LATS1以后可以抑制体外前破骨细胞向成熟破骨下细胞的分化进程，但并

不影响破骨细胞的成熟。而这与经典的Hippo信号其他家族成员Ste20样蛋白激酶

（theSte20-likekinase2，MST2），RAFF2，Yes相关蛋白（yesassociatedprotein，

YAP）反向调控破骨细胞分化截然相反。以上结果均表明LATS1在破骨细胞分化

过程中扮演了重要的角色。

为了进一步探讨LATS1调控破骨细胞分化的机制，我们在RAWs细胞系中开

展了一系列的研究。首先我们发现RANKL可通过RANK/TRAF6/IKK/NEMO途径

记过LATS1，激活后的LATS1可影响NFKB信号的转录输出。为了验证此信号通

路对细胞分化的影响，我们选取Rank-Cre；Lats1f/f进行免疫组化和体外分化实验，

结果发现激活P65可挽救Lat