低剂量丙环唑和苯醚甲环唑诱导的烟曲霉对三唑类医药抗药性.pdfVIP

目录

摘要I

ABSTRACTIII

英文缩略表VI

第一章文献综述1

1.1丙环唑和苯醚甲环唑的研究现状1

1.1.1丙环唑和苯醚甲环唑简介1

1.1.2丙环唑和苯醚甲环唑在土壤中的消解3

1.1.3丙环唑和苯醚甲环唑对非靶标生物的影响3

1.1.4植物病原菌对丙环唑和苯醚甲环唑的抗药性4

1.2烟曲霉对三唑类医药的抗药性6

1.2.1烟曲霉致病性6

1.2.2与农用三唑类杀菌剂结构类似的三唑类医用抗真菌药物7

1.2.3烟曲霉对三唑类医药的抗性现状8

1.3烟曲霉对三唑类医药的抗性机制9

1.3.1cyp51A基因突变9

1.3.2cyp51基因和外排泵基因的过量表达13

cyp51基因过量表达13

外排泵基因过量表达13

1.3.3其它抗性机制14

1.4烟曲霉抗药性的来源15

1.4.1三唑类医用杀菌剂在临床治疗的使用15

1.4.2农用唑类杀菌剂在田间的使用16

1.5烟曲霉的传播途径17

1.6本文的研究目的及意义18

第二章苯醚甲环唑和丙环唑对烟曲霉抗性的梯度诱导19

2.1引言19

2.2试验材料20

2.2.1药品与试剂20

2.2.2培养基与溶液21

2.2.3仪器与设备22

2.2.4供试菌株23

2.3试验方法23

2.3.1杀菌剂和医药母液的配制23

2.3.2供试敏感烟曲霉菌株23

2.3.3试管中敏感烟曲霉菌株的抗性诱导23

2.3.4烟曲霉诱导菌株的敏感性测定24

2.3.5烟曲霉诱导菌株cyp51A基因测序25

烟曲霉菌株DNA提取25

烟曲霉菌株cyp51A基因扩增25

2.3.6烟曲霉诱导菌株鉴定26

烟曲霉菌株潮霉素基因扩增26

烟曲霉诱导菌株STR测序27

2.3.7烟曲霉抗性菌株保存28

2.4结果与讨论29

2.4.1梯度诱导过程中烟曲霉菌株的生长情况29

2.4.2诱导菌株对三唑类化合物的敏感性29

2.4.3抗性诱导菌株cyp51A基因突变34

2.4.4抗性诱导菌株的验证36

2.5小结37

第三章cyp51A突变菌株抗药性的分子机制39

3.1引言39

3.2试验材料40

3.2.1药品与试剂40

3.2.2培养基与溶液41

3.2.3仪器与设备42

3.2.4质粒与供试菌株42

3.3试验方法43

3.3.1pBC-Hygro质粒转化感受态E.coliDH5α菌株43

3.3.2pBC-Hygro质粒抽提43

3.3.3pBC-Hygro质粒线性化43

3.3.4含cyp51A的DNA片段的扩增44

目的片段引物的设计44

目的片段的扩增44