微生物的分离和纯培养专家讲座.pptxVIP

微生物分离和纯培养

显微镜和显微技术

微生物的分离和纯培养专家讲座

第1页

§1微生物分离和纯培养

微生物的分离和纯培养专家讲座

第2页

无菌技术

用液体培养基分离、培养

用固体培养基分离、培养

二元培养物分离、培养

选择培养分离

单孢子分离

微生物分离方法

微生物保藏技术

微生物的分离和纯培养专家讲座

第3页

微生物纯种分离

将各种混杂微生物，经某种技术或方法分离成纯种过程

纯培养（pureculture）

在适宜条件下培养纯种取得培养物（群体）

微生物的分离和纯培养专家讲座

第4页

单个微生物在适宜固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度能够形成肉眼可见、有一定形态结构子细胞群体，称为菌落(colony)。

菌落

微生物的分离和纯培养专家讲座

第5页

一个菌落是一个纯种，也是一个纯培养；

单个微生物只在固体培养基上形成菌落；

在液体培养基中不会形成菌落

微生物的分离和纯培养专家讲座

第6页

同一细菌在不一样培养平板上形成不一样特征菌落

微生物的分离和纯培养专家讲座

第7页

一、用固体培养基（营养琼脂平板）分离纯种

微生物的分离和纯培养专家讲座

第8页

微生物样品

各种混杂

某种方法

分散成单个微生物

平板

培养

单菌落

每个菌落为纯种（纯培养）

单菌落转接培养

纯种（纯培养）

（一）、微生物纯种分离原理和方法

微生物的分离和纯培养专家讲座

第9页

（二）、纯种平板分离不一样方法

从土壤中分离纯微生物

104/ml

103/ml

102/ml

101/ml

微生物的分离和纯培养专家讲座

第10页

涂布平板法

稀释倒平板法

1、涂布平板法（spreadplatemethod)

微生物的分离和纯培养专家讲座

第11页

2、稀释倒平板法（倾注平板法）（pourplatemethod)

微生物的分离和纯培养专家讲座

第12页

分区划线法（蛇形线法）操作图

第一区划线

灭菌接种环

第二区划线

灭菌接种环

第三区划线

灭菌接种环

3、平板划线法（streakplatemethod）

微生物的分离和纯培养专家讲座

第13页

分区划线法适用范围：

适合用于浓度较大样品

微生物的分离和纯培养专家讲座

第14页

连续划线法操作图

连续划线法适用范围：

适合用于浓度较小样品

微生物的分离和纯培养专家讲座

第15页

培养严格厌氧微生物

4、稀释摇管法（dilutionshakeculturemethod)

微生物的分离和纯培养专家讲座

第16页

二、用液体培养基分离纯化培养

个别细胞较大细菌

原生动物、藻类

接种物液体培养基次序稀释法分离

营养琼脂平板不能长菌落

怎样分离纯培养？

微生物的分离和纯培养专家讲座

第17页

培养物在液体培养基中进行高度次序稀释，假如经稀释后同一稀释度大多数（95%以上）试管中没有微生物生长，有微生物生长试管得到培养物可能就是纯培养物。

微生物的分离和纯培养专家讲座

第18页

上节课知识回顾

微生物分离纯化方法

用固体培养基分离、纯培养

稀释倒平板法

涂布平板法

平板划线法

稀释摇管法

用液体培养基分离、纯培养

微生物的分离和纯培养专家讲座

第19页

三、单细胞（单孢子）分离

采取显微分离法从混杂群体中直接分离单个细胞或单个个体进行培养以得到纯培养，称为单细胞（单孢子）分离法。

微生物的分离和纯培养专家讲座

第20页

个体较小微生物需采取显微操作仪

分离难度与细胞或个体大小成反比

营养琼脂平板上不能形成菌落

较大微生物可使用毛细管提取

微生物的分离和纯培养专家讲座

第21页

Eachcolonywasexaminedmicroscopically

微生物的分离和纯培养专家讲座

第22页

四、选择培养分离

创造适于目标微生物生长条件

原理

促使目标微生物快速生长呈优势菌

抑制非目标微生物生长

从混杂微生物中分离目标微生物

微生物的分离和纯培养专家讲座

第23页

1、利用选择培养基进行直接分离

选择培养基

只允许特定微生物生长，而同时抑制或阻止其它微生物生长培养基

微生物的分离和纯培养专家讲座

第24页

土壤

目标菌优势

非目标菌

选择培养基

直接分离

单细胞

选择培养基平板

（含牛奶或酪蛋

白唯一C、N源）

37℃

培养

目标菌落

菌落周围有透明蛋白水解圈

1、利用选择培养基进行直接分离

例一：分离筛选蛋白酶产生细菌

微生物的分离和纯培养专家讲座

第25页

含牛奶选择培养基目标菌生长平板

营养选择因子：牛奶或酪蛋白

只允许分解利用蛋白质目标菌生长，淘汰非目标菌

长出目标菌并不一定是同种细菌，但皆产蛋白酶

例一：分离筛选蛋白酶产生细菌

微生物的分离和纯培养专家讲座

第26页

例二：分离筛选产高温淀粉酶（65℃）细菌

单细胞

选择