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Sirt1去乙酰化p62阻滞其泛素依赖性降解的机制及其在肝癌

发生发展中的作用

浙江大学医学院肿瘤学专业

博士研究生陈苗琴

导师金洪传

中文摘要

背景：

肝癌是预后最差的恶性肿瘤之一，其全球发病率位于第六，死亡率位于第三。

中国是肝癌大国，约占全球50%的新发和死亡病例，肝癌在中国死亡率位于第二，

总体五年生存率不足20%，严重威胁着我国人民的生命健康。由于肝癌发生发展

的分子机制复杂且尚未被完全阐明，致使靶向肝癌的治疗手段非常受限。肝癌的

发生发展涉及到多个癌基因的异常活化和抑癌基因的失活。配体蛋白p62/SQSTM1

在肝癌等实体肿瘤中高表达且与临床不良预后具有显著正相关性。但肝癌中p62

异常高表达的分子机制尚未被完全阐明。蛋白翻译后修饰包括乙酰化等在调控蛋

白质表达和功能中发挥重要作用。但目前p62乙酰化修饰在肿瘤发生发展中的作

用和机制尚未明确。因此，阐明p62乙酰化修饰的分子机制并明确其在肝癌等恶

性肿瘤中异常高表达作用，对靶向p62的肿瘤防治策略具有重要意义。

目的：

阐明p62乙酰化修饰的具体分子调控机制，解析乙酰化修饰调控p62蛋白表达

的分子机制及其在肝癌发生发展中的作用。

方法：

通过MTS、裸鼠成瘤等实验检测p62蛋白表达改变对肝癌细胞体内外增殖的作

II

用。运用液相色谱质谱检测（LiquidChromatographMassSpectrometry，LC-MS）

分析p62乙酰化位点，并利用免疫沉淀(Immunoprecipitation，IP)进行验证。通过

免疫共沉淀实验(Co-immunoprecipitation，Co-IP)、体外蛋白相互作用实验（Pull

down）明确去乙酰化酶Sirt1与乙酰转移酶GCN5与p62相互作用并共同调控p62乙酰

化稳态。通过免疫印迹（WesternBlot，WB）、实时荧光定量PCR（Quantitative

Real-timePCR，qRT-PCR）方法检测肝癌细胞中Sirt1对p62蛋白质和信使RNA

（mRNA）表达的调控。利用蛋白半衰期实验、体内泛素化实验证明Sirt1阻滞Keap1

介导的p62泛素化依赖性降解。最后通过MTS、二乙基亚硝胺（Diethylnitrosamine，

DEN）诱导小鼠原发肝癌模型等实验方法检测Sirt1去乙酰化p62上调其表达在肝癌

发生发展中的作用。

结果：

肝癌中p62蛋白水平高表达，与病人不良预后正相关。敲低p62表达能明显

抑制肝癌细胞体内外生长。p62K295位点存在乙酰化修饰，去乙酰化酶Sirt1与

p62直接相互作用并抑制p62K295位点乙酰化。乙酰转移酶GCN5介导p62乙酰化，

Sirt1抑制GCN5介导的p62K295乙酰化。Sirt1与p62在肝癌组织中高表达且正

相关，肝癌细胞中敲低Sirt1表达后p62表达下降，细胞增殖明显受抑。敲低Sirt1

表达上调p62乙酰化水平，增加其与E3泛素连接酶Keap1的结合，促进p62多聚

泛素化降解。DEN诱导的小鼠肝癌模型中，肝细胞特异性Sirt1敲除明显减缓小鼠

肝癌的发生发展，而同时过表达p62则能逆转。

结论：

肝癌中高表达的Sirt1去乙酰化p62K295,通过抑制其与E3连接酶Keap1的结

合来阻滞p62的多聚泛素化依赖性降解，上调p62的蛋白表达，从而促进肝癌的

发生发展。我们的研究提示，靶向Sirt1-p62轴可能成为治疗肝癌的一个新的策

略。

关键词：肝癌、p62/SQSTM1、乙酰化、Sirt1、GCN5、泛素化、Keap1

III

Sirt1deacetylatesp62topreventit