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PCR实验室基因扩增检验人员培训试题及答案

一、单项选择题（每题2分，共40分）

1.以下关于PCR技术基本原理的描述，错误的是：

A.通过变性-退火-延伸循环实现DNA扩增

B.Taq酶在延伸阶段催化dNTP聚合

C.引物与模板的结合发生在变性阶段

D.扩增产物长度由引物在模板上的结合位置决定

2.临床基因扩增检验实验室的核心工作区域不包括：

A.试剂准备区

B.样本处理区

C.扩增产物分析区

D.清洁消毒区

3.为防止扩增产物污染，实验室各区的气流方向应遵循：

A.试剂准备区→样本处理区→扩增区→产物分析区（正压递减）

B.产物分析区→扩增区→样本处理区→试剂准备区（正压递减）

C.试剂准备区←样本处理区←扩增区←产物分析区（负压递增）

D.无特殊要求，保持通风即可

4.以下哪种物质可有效破坏DNA，用于实验室台面污染清除？

A.75%乙醇

B.10%次氯酸钠

C.生理盐水

D.去离子水

5.实时荧光定量PCR（qPCR）中，Ct值的定义是：

A.荧光信号达到设定阈值时的循环数

B.扩增产物达到平台期的循环数

C.引物二聚体出现的循环数

D.模板初始浓度的对数

6.关于PCR引物设计的基本原则，错误的是：

A.引物长度通常为18-25个核苷酸

B.引物GC含量应控制在40%-60%

C.引物3’端避免连续相同碱基（如AAA）

D.引物5’端必须与模板严格互补

7.临床样本（如咽拭子）进行核酸提取时，以下操作错误的是：

A.样本处理前需进行离心，去除杂质

B.提取过程中需戴双层手套并及时更换

C.不同样本的提取试剂可共用同一支移液器

D.提取完成后需对操作台面进行紫外线消毒

8.实验室质量控制中，“阴性对照”的作用是：

A.验证扩增反应体系的有效性

B.检测是否存在交叉污染

C.评估样本核酸提取效率

D.确定扩增产物的特异性

9.以下哪种情况会导致qPCR结果出现“假阴性”？

A.扩增区与产物分析区未严格分隔

B.样本核酸提取过程中被蛋白酶K污染

C.引物与模板结合区域发生突变

D.荧光探针标记的报告基团降解

10.实验室生物安全管理中，关于医疗废物处理的要求，错误的是：

A.一次性吸头、离心管需放入专用黄色医疗废物袋

B.被血液污染的实验服应高压灭菌后再清洗

C.废弃的扩增产物可直接倒入普通垃圾桶

D.医疗废物需由有资质的单位统一回收处理

11.关于PCR实验室人员防护装备的使用，正确的是：

A.进入试剂准备区需佩戴N95口罩

B.样本处理区必须穿戴防水围裙

C.扩增区操作时可佩戴普通一次性手套

D.所有区域均需穿着专用实验服，不得穿出实验室

12.以下哪项是判断PCR扩增效率是否合格的标准？

A.标准曲线斜率在-3.1至-3.6之间，R2≥0.98

B.熔解曲线出现单一峰，峰高≥500RFU

C.阴性对照Ct值≤30

D.阳性对照Ct值≥40

13.进行HBV-DNA定量检测时，若样本Ct值为38（检测下限为Ct=40），应报告为：

A.低于检测下限

B.阳性（具体数值）

C.临界值，需重复检测

D.污染导致的假阳性

14.实验室发生样本管破裂、内容物泄漏时，应首先：

A.立即用纸巾擦拭

B.关闭生物安全柜，喷洒10%次氯酸钠静置15分钟

C.通知上级主管

D.更换手套继续操作

15.关于反转录PCR（RT-PCR）的描述，正确的是：

A.仅需DNA聚合酶参与反应

B.模板为RNA，需先反转录为cDNA

C.无需设置内参基因

D.扩增产物长度通常超过500bp

16.以下哪种因素不会影响核酸提取效率？

A.样本保存时间（超过48小时未冷冻）

B.裂解液与样本的比例（1:1）

C.磁珠吸附核酸时的温度（4℃）

D.洗脱缓冲液的pH值（7.5）

17.实验室日常监测中，空气洁净度检测应采用：

A.沉降菌法（平板暴露法）

B.肉眼观察法

C.温湿度记录仪

D.紫外灯辐照强度检测仪

18.进行室内质量控制时，连续5次检测同一浓度质控品，结果均偏高20%，可能的原因是：

A.质控品过期

B.移液器校准不准确

C.扩增仪温度均匀性差

D.以上均可能

19.关于PCR实验室记录的管理要求，错误的是：