靶向二代测序在感染性疾病诊疗中的规范化应用专家共识解读（2025版）PPT课件.pptxVIP

靶向二代测序在感染性疾病诊疗中的规范化应用专家共识2025解读精准诊疗的标准化指南

目录第一章第二章第三章技术原理与定位专家共识背景规范化应用流程

目录第四章第五章第六章临床应用场景质量控制体系实施挑战与展望

技术原理与定位1.

靶向测序技术特点通过设计特异性探针针对病原体基因组保守区域进行富集，显著提高检测灵敏度，尤其适用于低载量病原体检测。高特异性捕获可同时检测细菌、病毒、真菌及寄生虫等多种微生物，覆盖临床常见感染病原体及其耐药基因。多重病原体覆盖结合自动化生物信息学分析管道，实现从样本到报告的24小时内完成，满足临床时效性需求。快速数据分析流程

适用于传统培养阴性或混合感染病例，如肺部感染、中枢神经系统感染及血流感染等疑难病例的病原学诊断。复杂感染诊断可同步识别结核分枝杆菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）等耐药菌株的关键耐药突变位点。耐药基因检测对HIV感染者、移植术后患者等免疫抑制人群的机会性感染病原体具有更高检出率。免疫缺陷患者感染针对未知病原体可通过宏基因组分析扩展检测范围，为突发传染病早期识别提供技术支撑。新发传染病预警感染性疾病应用范围

补充传统检测作为培养、PCR等常规方法的补充，解决传统方法检测周期长、阳性率低的技术瓶颈。个体化治疗指导通过精准识别病原体及其耐药特征，为临床制定针对性抗感染方案提供分子依据。基于病原体分子分型结果可追踪院内感染传播链，指导感染防控措施优化。感染控制决策临床诊断价值定位

专家共识背景2.

多学科专家组包含临床感染科、微生物学、分子生物学、生物信息学等领域专家，其中院士级专家占比达30%。权威机构牵头由国家感染性疾病临床医学研究中心联合中华医学会微生物学与免疫学分会主导，汇集国内20余家三甲医院及科研机构。国际协作支持参考WHO耐药菌监测指南及美国CDC分子诊断标准，特邀3位国际临床微生物学会（ICCM）委员参与评审。制定机构与参与专家

技术标准化明确tNGS在病原体检测中的操作流程（如DNA提取阈值、扩增引物设计规范），覆盖细菌、真菌、病毒和寄生虫四类病原体。临床决策支持针对血流感染、CNS感染、呼吸系统感染等6大场景制定分级报告解读策略（如必报/选报病原体清单）。质量控制体系建立从样本采集到生物信息分析的11项质控指标，包括测序深度≥1000×、阴性对照阈值等硬性要求。010203核心目标与适用范围

技术迭代部分新增靶向捕获探针设计原则（如保守区覆盖度≥95%），对比mNGS强调降低人源宿主核酸干扰（从90%降至50%）。引用国内多中心研究（n=1,200例），显示tNGS对结核分枝杆菌复合群的灵敏度提升至82.3%（传统培养为61.5%）。首次纳入快速耐药预测模块，涵盖碳青霉烯酶基因（KPC/NDM等）和抗真菌药物靶点（ERG11/FKS1）的自动化分析流程。临床验证数据耐药基因检测关键更新要点概览

规范化应用流程3.

样本采集与处理标准优先选择与感染部位直接相关的临床样本（如脑脊液、肺泡灌洗液等），需根据疑似病原体特性匹配最佳样本类型，避免因样本选择不当导致假阴性。样本类型选择严格执行无菌操作规范，采用专用保存管（如核酸稳定剂），确保样本在采集后2小时内完成预处理或低温（-80℃）保存，防止核酸降解。标准化采集流程样本需满足最低核酸浓度要求（如DNA≥0.1ng/μL），并通过完整性检测（如DV200值＞30%），血性样本需评估人源DNA占比（建议＜95%）。质量控制指标

核酸提取标准化采用经认证的病原体核酸提取试剂盒，针对不同样本类型（如痰液、组织）优化裂解条件，并行阴性对照监测交叉污染。靶向扩增需控制PCR循环数（通常18-22轮），文库浓度需达到测序平台要求（如Illumina平台≥1nM），片段大小分布应符合预期（主峰200-500bp）。tNGS要求目标区域平均覆盖深度≥100×，关键耐药基因位点需≥500×，数据量建议控制在20Mreads以内以提高成本效益。每批次实验需包含阴性对照（空白提取对照、无模板PCR对照）和阳性对照（已知低浓度标准品），用于评估检测下限与背景噪音。文库构建质控测序深度监控污染排除体系实验操作质量控制

要点三病原体数据库匹配使用临床级病原基因组数据库（包含≥100种核心病原体及耐药突变位点），比对算法需优化人源序列过滤（如Kraken2/BWA-MEM）。要点一要点二结果阈值设定明确阳性判定标准（如细菌/真菌≥3条特异性读长，病毒≥5条），耐药基因需验证突变频率（通常＞5%）及临床关联性。报告临床解读分级报告病原体证据等级（确诊/疑似/定植），整合患者临床表现与常规检测结果，避免脱离临床背景的过度解读。要点三生物信息分析路径

临床应用场景4.

突破传统检测瓶颈靶向二代测序（tNGS）可检测培养阴性、低载量或罕见病原体（如结核分