药物化学第十六章.pptVIP

第十六章药品质量控制中的现代

分析方法与技术;基本要求;

毛细管气相色谱法使用的色谱柱是空心的毛细管柱，叫开管柱：固定液涂渍或固定化在柱管内壁上，而载气和其中的样品从中心的通道上通过。柱材料主要是熔融石英（FSOT）。

;（一）色谱柱

1．毛细管柱的类型：

柱类型柱内径柱长液膜厚度

普通开管柱0.2～0.53mm5～60m0.1～1.0μm

壁涂开管柱

多孔层开管柱

担体涂渍开管柱

微内径开管柱﹤100μm

大内径开管柱0.32mm1μm或5μm

;2．毛细管柱的选择

常用的固定液有：SE-31、OV-1、SE-54、SE-52、OV-1701、Carbowax20M。

柱的选择：根据样品组分的沸点，一般地，相差2℃或2℃以上的组分，采用非极性毛细管柱分离；若沸点相差在2℃以内的组分，则需在极性较大的毛细管柱上分离。?

;不分流进样：须利用溶剂效应或冷阱，操作较难

特别适用于痕量分析和宽沸程样品

柱头进样：必须使用外径为0.17～0.23mm的

细针，柱内径必须大于0.32mm,

不能通过隔垫进样，缓慢进样

对热不稳定、稀的和宽沸程样品较

理想；能给出定量结果

非挥发物在柱的中积累导致柱变性

和柱效损失;直接进样：样品无须事先浓缩，进样器温度可较

低，载气消耗量小，分析所需样量小

适用于浓度范围要比不分流进样宽一个

数量级以上的样品，有利于对热不稳定

的样品；当样品中含有挥发性低的组分

时，难于定量分析

;

（三）应用示例----人尿中劳拉西泮的检测

1.测定意义：劳拉西泮(简称LRZ)上用为催眠、镇静和抗癫痫药物,常被犯罪分子作为麻醉药物用于麻醉抢劫等麻醉后犯罪。为了确证这类案件的性质,经常需要对受害人的血、尿等体液中麻醉药物或其代谢物进行检测。人体摄入该药后其血液中药物浓度较低,且犯罪分子所用药量一般不使受害人死亡,而且此类案件一般报案较迟，因此血中药物浓度较低,对其???测较为困难。该药主要以葡萄糖醛酸苷的形式由尿液排泄。

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;3.样品预处理----酶解及萃取

取检尿1ml,加10mg/L的羟乙基氟西泮(HEF)标准工作液10μl,再加pH4.8的乙酸盐缓冲液50μl及β-葡萄糖醛酸苷酶溶液0.1μl,置于55℃水浴中水解4ｈ冷至室温后加pH10.8的碳酸盐缓冲液0.5ml及乙醚5ml,涡旋2min,离心,分取上层有机相4ml置于经硅烷化处理的带尾管的鸡心瓶中,加甲醇0.4ml,于40℃水浴中挥发至约0.1ml,进样1μl进行GC分析;4.方法学评价

（1)选择性:空白尿1ml及空白尿1ml加LRZ和HEF标准液,经酶解、萃取后进样分析所得色谱图表明尿中杂质不干扰检测.

（2)线性试验:用空白尿配制不同浓度的LRZ标准液进行酶解、萃取、进样分析,将LRZ与HEF色谱峰面积的比值与LRZ在尿液中的质量浓度进行线性回归,得到工作曲线方程:Y=3.1×10-3X–3.0×10-3,ｒ=0.998。LRZ在尿中的浓度为50～500μg/L范围内呈良好的线性.;（3)萃取液的选择及萃取率:作者进行了多种溶剂萃取

LRZ的研究,由经萃取与未经萃取所得色谱峰面积

比计算LRZ的萃取率,得(mean±SD)为(83.4±3.1)%。

（4）检出限:以3倍信噪比计算检出限,得本法的检出

限为5μg/L。

（5)回收率:由工作曲线计算LRZ的质量浓度及其回收

率,得(mean±SD)为(103.3±5.1)%。

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5.尿液检测:志愿者口服LRZ2ｍｇ后,于32小时内收集其排泄的尿液进行检测,LRZ于9h达尿中最高浓度为444μｇ/L,检测结果表明,本方法适合于麻醉后犯罪案件中ＬＲＺ的检测要求。

;二、手性药物的高效液相色谱法

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;（二）手性HPLC拆分法的类型

直接法：柱前手性衍生化法

间接法：手性流动相拆分法、手性固定相拆分法

1．柱前手性衍生化法：对映体混合物以手性试剂作柱前衍生化，形成非对映体，然后以常规（偶见