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磁性微球用于大豆基因组DNA纯化研究

近年来，转基因产业在迅速发展。然而，尽管转基因技术给人类带来了巨大的利益，但由于基因改造而引起的安全事件屡屡发生，引起了广泛的关注和关注。由于转基因产品的安全性在世界范围内仍存在争议，因此世界各国制定了法规以加强转基因产品的管理并设置贸易壁垒以限制此类产品的进口，欧盟，新西兰，澳大利亚，俄罗斯，沙特阿拉伯。日本和韩国等发达国家已经对转基因产品实施了强制性标签制度。如果制造商或贸易商向上述国家出售农产品，则必须证明该产品不含转基因成分或不符合相关进口国的法规要求。自1995年以来，大豆已从净出口变为净进口，进口逐年增加。进口大豆主要来自转基因作物的种植国，例如美国，加拿大，巴西和阿根廷。中国种植的大豆属于非转基因品种，这是中国大豆和加工产品在国际竞争中的优势。当前，非转基因大豆在国际市场上非常受欢迎，其价格比转基因大豆高15％至20％。加强转基因大豆的检测，全面实施“标签制度”，对发展我国大豆产业具有重要意义。它可以标准化非转基因大豆，确保中国非转基因大豆的优势，并防止转基因大豆对中国市场的影响。目前，各国转基因检测机构对转基因产品的检测主要基于分子水平的检测，核酸提取质量是影响后续分子鉴定的重要因素。在转基因产品的检测中，分子生物学检测方法的灵敏度和特异性在很大程度上取决于样品制备过程（核酸提取过程）。与传统的核酸提取方法相比，基于纳米磁珠的核酸提取方法具有操作简单，提取结果重复性好，稳定性高的特点，已成为一种很有前途的提取方法。

一、磁性微球概述

1、磁性微球的结构和性质

磁性微球是通过适当的理化方法将无机磁性材料和有机高分子材料结合而形成的一种多功能复合材料。根据球芯和外壳材料的磁性特点可分为磁性核或磁性壳型，混合型和多层型。无机磁性材料主要有金属（Fe、CO、Ni）、铁氧体（MeO﹒Fe２O３、Fe３O４）、合金（FeCO）、铁酸盐等，其中Fe３O４由于磁性能好，制作工艺简单，成本低，而成为应用最广泛的磁核。高分子材料有天然与合成两类。天然高分子材料主要有琼脂糖、淀粉、明胶、纤维素、壳聚糖等；合成高分子材料主要有聚苯乙烯、聚苯乙烯醇等。目前磁性微球的制备方法主要有磁性粒子单体聚合法、磁性粒子聚合物组合法和磁性粒子聚合物原位生成法。磁性粒子聚合物组合法制备磁性微球方法简单，但制备出的磁性微球单分散性差，形貌不规则。磁性粒子单体聚合法主要是以高分子单体聚合的方法为主，相对磁性粒子聚合物组合法要复杂，制备出的磁性微球分布较宽、粒径较大或包埋磁性粒子效果差，使得后期应用受到限制。通过不同的制备方法可得到性能不同的磁性微球，再加上表面功能基团的修饰，使得磁性微球几乎可以偶联大部分生物活性物质。应用于生物磁分离技术中的磁性微球应具有合适的磁响应度、均一的粒径分布、良好的生物相容性、稳定的特异吸附表面等特性。

2、磁性微球的分离原理

磁分离技术的分离有２种方式，即直接分离法和间接分离法。直接分离法是指磁性微球表面连接的是能够特异性结合目标产物的基团，在溶液体系中特异性结合目标产物，在磁场作用下与其他物质分离。间接分离法是在分离前先对目标产物进行处理（例如抗原纯化中，首先将抗原与第一抗体连接），使其能够与磁性微球表面的基团（第二抗体）结合，在磁场作用下将携带目标产物的复合物分离出来，再借助其他手段解吸附目标产物。

3、磁性微球的制备方法

（1）包埋法

包埋法是早期研究的制备磁性微球的一种方法，该方法是将预先制备好的磁性粒子分散包埋在一些天然的高聚物中，如淀粉、葡聚糖、纤维素或者蛋白中，通过混合，在一定的条件下使之包埋在其中，从而整个高聚物具有磁性，一般情况下，磁性粒子与高聚物中之间的作用力主要有范德华力、氢键、金属离子与高聚物之间的螯合作用力，这种方法相对来说较简单，只要预先制备好磁性粒子与高聚物之间有作用力并包埋分散在其中即可，其磁响应性可以根据磁性粒子的多少调节，但该方法有其固有的缺点，所得到的磁性聚合物形状不规则且不易控制，在包埋过程中可能会混入一些其它杂质，同时，对于聚合物的选择有一定的要求，因此，其制备受到一定的限制。

（2）单体聚合法

单体聚合法主要有以下几种，乳液聚合法、悬浮聚合法、分散聚合法等。乳液聚合法将磁性粒子分散在水相中，然后加入单体，进行乳化，得到乳化体系，然后根据乳液聚合的基本原理进行聚合，可以得到单分散性较好的磁性微球。悬浮聚合法是将磁性粒子均匀地分散在含有聚合物单体、引发剂和稳定剂等体系中进行聚合反应制得的，这种方法可以将磁性粒子均匀于分散在微球中，传统的悬浮聚合法采用机械搅拌或震荡的形式，制备的磁性微球颗粒较大，且不均匀，并且磁性粒子分散不均匀，在磁场下的各个微球的磁性行为不一致，而喷雾式悬浮聚合法可以解决此缺点，阳承利等将疏水性磁流体、甲基丙烯酸甲酯