高中生物课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与记数养新人教版选修.pptVIP

课题2微生物的分离与计数;（一）筛选菌株

自然界筛选：根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。(如耐高温的TaqDNA聚合酶)

实验室筛选：人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。

选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。目的是从众多微生物中分离所需要的微生物。;1.在培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是是什么物质？;测定微生物数量的方法：

1、直接计数法：最常用的显微镜直接计数。

先将待测样品制成悬液，然后取一定量的悬液放在显微镜下进行计数。根据在显微镜下观察到的微生物数目来计算出单位体积内的微生物总数。

优点：设备简单、能观察微生物的形态特征。

缺点：不能区分死菌和活菌；

难以计数微小的细菌。

一般用于纯培养悬浮液中各种单细胞菌体的计数。

;2、间接计数法：最常用稀释涂布平板计数法

应用：统计样品中活菌的数目

;1.原理：尿素是一种重要的农业氮肥，只有当土壤中的细菌将尿素分解成氨之后，才能被植物利用。尿素细菌能合成脲酶，在脲酶的作用下尿素被分解成氨。

CO(NH2)2+H2OCO2+2NH3

;（2）实验设计的内容包括实验方案、材料用具、实施步骤和时间安排等。

（3）实验流程：

土壤取样

样品系列稀释

涂布平板与培养

观察并记录结果;

;3、培养不同微生物往往需要不同培养温度。

细菌一般在30～37℃培养1～2d，

放线菌一般在25～28℃培养5～7d，

霉菌一般在25～28℃的温度下培养3～4d。

4、在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。

点评：菌种中有些菌体增殖快，有些菌???增值慢，所以培养时间要充足，使得每个菌体都能形成肉眼可观察到的菌落。

5、菌落的特征包括形状、大小、隆起程度、颜色等方面。;实验设计;准备牛肉膏蛋白胨培养基（作为对照组）和选择培养基。将菌液稀释相同的倍数（见教材23页“样品稀释流程示意图”）。稀释倍数为103～107。每个稀释度均用3个选择培养基，1个牛肉膏蛋白胨培养基，共需要15个选择培养基，5个牛肉膏蛋白胨培养基（都作好标记）。;将10g土样加入盛有90mL无菌生理盐水的锥形瓶中（锥形瓶体积为250mL），充分摇匀，吸取上清液1mL，转移至盛有9mL的生理盐水的无菌大试管中，依次等比稀释至107稀释度，并按照由107～103稀释度的顺序分别吸取0.1mL进行平板涂布操作。按照浓度从低到高的顺序涂布平板。;挑选选择培养基中不同形态的菌落接入含酚红培养基的斜面中，观察能否产生如课本中图2-10的颜色反应。;（1）对分离的菌种作进一步的鉴定，还需要借助生物化学的方法。

(2)在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的脲酶将尿素分解成了氨。氨会使培养基的碱性增强，PH升高。因此，我们可以通过检测培养基pH变化来判断该化学反应是否发生。

(3)在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。

[思考10]测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将一定体积的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到伊红美蓝培养基上培养，大肠杆菌菌落呈现黑色，通过记述得出水样中大肠杆菌的数量。你认为在该实验中至少应取三个水样。;四、课堂总结、点评;五、课余作业;

;3.（09安徽卷）下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误的是

A.用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板

B.取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.