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尿酸测定方法研究进展

一、尿酸概述

生物分子尿酸(2,4,6三羟基嘌呤,简称UA)是人体内嘌呤代谢的最终产物,健康成年人正常尿酸的水平为血清中0.15～0.4mmoL/L,尿酸中250～750mg/L(1.49～4.46mmol/(L.24h)。人体内尿酸异常是人体疾病的反映,可以反映出嘌呤代谢的有关的一些疾病。例如:痛风和Lesch-Nyhan综合症,高尿酸血等都会引起尿酸异常。因此,近年来,尿酸的检测和分析在疾病的临床诊断和治疗方面的应用日益广泛。尿酸分子式为C5H14N4O3,MW168.11,不溶于水,也难溶于酸。尿酸是一种含有嘌呤结构的化合物,也是嘌呤的最重要衍生物。它是一种白色结晶性物质,极难溶于水,也难溶于醚和乙醇,具有弱碱性,可以与强酸成盐。尿酸在生物体内以盐的形式存在,因而溶解度较高。尿酸在尿酸酶的作用下,可以被氧化成尿素囊,其反应式为:。食物中核苷酸分解吸收而来的外源性尿酸约占20％，人体内核苷酸分解代谢产生的内源性尿酸约占80％。

血浆中尿酸只能通过肾脏排出体外，如尿酸排泄障碍可引起血尿升高。肾脏对尿酸的排泄分4个阶段：(1)肾小球自由滤过；(2)近端肾小管主动重吸收(占滤过量的98％～99％)；(3)肾小管的分泌(达滤过量的50％)；(4)髓绊降支被动重吸收(占滤过量的40％～44％)。最终排出量只占滤过量的6％—10％。当肾小球滤过率下降，或肾小管对尿酸的重吸收增加或分泌减少时均可导致高尿酸血症。尿酸生成过多的原因主要有：(1)嘌呤合成代谢异常，其中大多属多基因遗传缺陷，而酶缺陷者仅占少数；(2)食物中嘌呤增加；(3)旺盛的细胞合成和分解。越来越多的证据显示，高尿酸血症与肥胖、高血压、血脂异常、糖尿病、胰岛素抵抗密切相关。当出现尿酸结晶形成和沉积，并引起特征性急性关节炎、痛风石、间质性肾炎及尿酸性尿路结石即为痛风。高尿酸血症中痛风的发病率占10％～20％。高尿酸血症是心脑血管疾病的危险因子，有研究显示高尿酸血症甚至是肾损害的起动因子。

二、尿酸的测定方法

随着社会的进步,人类对其自身健康水平日益关注。目前建立了许多尿酸的检测方法,如酶法、尿酸生物传感器检测法等,现概述几种常用的医学检测中应用的尿酸检测技术及进展。

1、尿酸酶法

将酶作为测定试剂用于待测物的分析起源于19世纪中叶,20世纪初已开始应用于临床系列化的测定,但真正现代意义的用于临床生化测定的酶试剂是20世纪30年代才出现,70年代得到了较大发展,同时在理论和实践上也日趋成熟和完善。如果从动力学角度对目前所使用的酶试剂加以分类,可分为单酶法和酶偶联法。尿酸酶广泛应用于尿酸测定以提高反应的比色特异性。尿酸酶法是以尿酸酶催化尿酸氧化为尿囊素和H202为基础进行的检测。

（1）紫外法

1947年Kalckar等口刮设计了尿酸酶紫外法。检测原理为：尿酸、水和氧气在尿酸酶氧化还原反应后生成尿囊素和H202。尿囊素与尿酸不同，在29HD-293舳处无吸收，通过测定反应前后吸光度的变化计算尿酸的含量。反应方程如下：

该方法反应时间长，吸光度的变化小，灵敏度低。检测波长是293咖，生化分析仪器未设置该波长，不能实现自动化。该方法被推荐为尿酸测定候选的参考方法。

（2）基于过氧化氢定量的尿酸间接测定法

尿酸酶法测定多数是建立在尿酸酶、过氧化物酶(或过氧化氢酶)与显色剂偶联反应的基础上，凡是可以进行过氧化氢定量的方法几乎都可以间接测定尿酸。

以烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)为指示反应的尿酸酶法测定原理是在过氧化氢酶的作用下，过氧化氢与乙醇反应生成乙醛，乙醛与NADH和H+在脱氢酶的作用下生成NAD+，NADH的下降量与尿酸的含量呈正相关，通过测定340nm处NADH吸光度的变化就可以计算尿酸的含量。反应方程如下：

此酶偶联方法检测340nm处NADH的变化，吸光率比较大，解决了灵敏度与自动化的问题，线性范围达到了120mg／L，但反应比较耗时。此反应第一步是特异的，但偶联的氧化还原反应和脱氢反应受到还原性物质和内源性脱氢酶的干扰。经过改进用烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADPH)代替NADH，并在反应体系中加入草酸盐，可减低检测受内源性脱氢酶干扰的程度。

尿酸测定以基于Trinder反应的酶偶联法应用最为广泛。此方法首先由Emerson在1943年提出。反应原理为：尿酸、氧气和水在尿酸酶的作用下生成H202，H202与联二茴香胺发生颜色反应，根据颜色变化来计算尿酸的含量。但是联二茴香胺是致癌物质，且需要用热酸或乙醇去蛋白，中间过程比较繁琐。不适合临床常规检测，没有得到推广。后来此方法得到进一步发展，酶反应生成的H202与4氨基替比林和各种不同的酚反应生成不同颜色的醌类物质。反应方程如下：

1973年Kabasalian等报道使用2，4，6-3溴苯酚作