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甜樱桃内参基因筛选研究：方法、验证与应用

一、引言

1.1研究背景与意义

甜樱桃（PrunusaviumL.），作为蔷薇科李属植物，是一种备受消费者喜爱的水果。其果实色泽鲜艳，味道甜美，富含多种营养成分，如维生素C、维生素E、钾、铁等，具有较高的营养价值和经济价值。随着人们生活水平的提高，对甜樱桃的市场需求不断增加，推动了甜樱桃种植业的快速发展。

在甜樱桃的生长发育过程中，基因表达调控起着关键作用。不同基因在不同组织、不同发育阶段以及不同环境条件下的表达水平差异，直接影响着甜樱桃的生长、开花、结果、品质形成以及对逆境的响应等重要生理过程。例如，与果实色泽相关的基因调控着花青素的合成，影响果实的外观品质；与风味物质合成相关的基因决定了果实的口感和香气。因此，深入研究甜樱桃的基因表达模式，对于揭示其生长发育的遗传机制、品质形成机理以及抗逆性机制具有重要意义。

在基因表达分析研究中，内参基因起着不可或缺的作用。内参基因，也被称为看家基因，通常被认为在不同组织、不同发育阶段以及不同实验条件下能够稳定表达。在进行基因表达分析时，如实时荧光定量PCR（qRT-PCR）、RNA-seq等技术，将目标基因的表达水平与内参基因的表达水平进行标准化处理，可以有效消除实验过程中由于样本量差异、RNA提取效率、反转录效率以及PCR扩增效率等因素对结果的影响，从而更准确地反映目标基因的真实表达情况。如果使用不稳定表达的内参基因进行标准化，可能会导致对目标基因表达水平的错误评估，进而得出错误的研究结论。因此，筛选出在甜樱桃不同条件下均能稳定表达的内参基因，是确保基因表达分析结果准确性和可靠性的关键前提。

从甜樱桃种植和品种改良的角度来看，内参基因筛选研究也具有重要的推动作用。通过对与甜樱桃重要农艺性状相关基因的表达分析，可以深入了解这些性状的遗传调控机制，为分子标记辅助育种提供理论依据。例如，筛选出与甜樱桃抗病性相关的基因，并准确分析其在不同抗病品种中的表达差异，有助于培育出更具抗病能力的新品种。同时，对于甜樱桃果实品质相关基因的研究，可以为改善果实品质、提高果实商品价值提供技术支持。在实际生产中，根据基因表达分析结果，还可以制定更加科学合理的栽培管理措施，提高甜樱桃的产量和质量，促进甜樱桃产业的可持续发展。

1.2国内外研究现状

在甜樱桃内参基因筛选方面，国内外学者已经开展了一系列研究工作，并取得了一定的成果。

国外研究起步相对较早，一些研究团队利用不同的实验材料和分析方法对甜樱桃内参基因进行了筛选。例如，[具体文献1]通过对甜樱桃不同组织（根、茎、叶、花、果实）的研究，利用qRT-PCR技术检测了多个常用内参基因的表达稳定性，筛选出了在不同组织中表现较为稳定的内参基因，如[具体基因1]，并将其应用于后续的基因表达分析研究中，成功揭示了某些与果实发育相关基因的表达模式。[具体文献2]则聚焦于甜樱桃在不同胁迫条件下（干旱、高温、低温）的内参基因筛选，通过综合评价多个候选内参基因的表达稳定性，确定了[具体基因2]等在胁迫条件下稳定表达的内参基因，为研究甜樱桃的抗逆分子机制奠定了基础。

国内的研究也在近年来逐渐增多。[具体文献3]以甜樱桃的花芽为材料，通过检测10个常用看家基因（28SrRNA、EF1-a1、EF1-a2、UBC、RPL13、18SrRNA、RSP3、CYP40、ACT2和α-TUB3）在花芽不同发育时期的表达水平，并利用GeNorm、NormFinder和BestKeeper等软件综合评价其表达稳定性，结果表明EF-1a2和RSP3在所有样品中稳定性最好，可作为甜樱桃花芽不同发育时期的内参基因。[具体文献4]针对甜樱桃不同发育阶段的果实，筛选出了适合该条件下的内参基因，为研究果实发育过程中的基因表达变化提供了可靠的标准化基因。

然而，目前的研究仍存在一些空白与不足。一方面，不同研究中所筛选出的内参基因存在差异，这可能是由于实验材料、处理条件、分析方法等的不同所导致的。因此，缺乏一个统一的、被广泛认可的甜樱桃内参基因标准。另一方面，现有的研究主要集中在甜樱桃的某些特定组织或发育阶段，对于不同组织、不同发育阶段以及不同环境条件下通用的内参基因筛选研究还相对较少。此外，随着高通量测序技术的发展，大量新的基因被发现，但对这些新基因作为内参基因的潜力研究还不够深入。填补这些研究空白，进一步完善甜樱桃内参基因筛选体系，对于推动甜樱桃基因表达分析和遗传机制研究具有重要意义。

二、甜樱桃内参基因筛选的理论基础

2.1内参基因的概念与作用

内参基因，又被称为看家基因或持家基因（house-keepinggenes），是指在生物体各类细胞中都表达，其产物是维持细胞基本生命活动所