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微生物实验室操作流程

作为在微生物实验室摸爬滚打了五年的技术员，我常跟新来的同事说：“咱这实验室啊，每一步操作都像走钢丝——看着简单，可稍有闪失，整批实验就得重来。”今天就以我日常的工作为主线，把这套从”开门准备”到”关门收尾”的全流程掰开揉碎讲讲，既有教科书般的规范，也带着点我自己踩过的坑、流过的汗。

一、实验前：像拆盲盒前先擦净手——细节决定成败

每天早上推开门的第一件事，不是急着冲去超净台，而是站在门口先”扫描”一圈。实验室的环境就像微生物的”风水”，温度、湿度、洁净度哪样不对，都可能让后续操作翻车。我通常会先看墙上的温湿度计：微生物实验最常见的是25-30℃，湿度控制在40%-60%。要是发现湿度偏高，就得先开一会儿除湿机——有回夏天梅雨季没注意，培养基倒平板时表面全是小水珠，结果培养出一堆杂菌，悔得我直拍大腿。

1.1环境消杀：给实验室”洗澡”

超净工作台是无菌操作的核心区，我一般提前半小时把它的紫外灯打开。记得刚入职那会儿，带教老师抓包过我一次：“小周，紫外灯照20分钟够吗？”我愣了一下，老师说：“至少30分钟，紫外线穿透性差，台面每个角落都得照到。”现在我操作前不仅开紫外，还会拿75%酒精把台面、内壁擦两遍——酒精棉片擦过的地方，得看到清亮的水痕才算到位。对了，还要检查通风按钮是否亮起，风量够不够大——有回通风管堵了没发现，结果操作时培养基刚倒进去就被吹得满台跑，狼狈得像在跟风抢平板。

1.2试剂与耗材：给实验”备粮草”

培养基是微生物的”饭”，得提前检查配制记录。比如做细菌培养用营养琼脂，真菌用马铃薯葡萄糖琼脂（PDA），这些我都记在小本本上。拿出来时要先看标签：有没有写配制日期？有没有灭菌标识？有次误用了没灭菌的生理盐水，结果平板上长出一片”花”，后来才发现灭菌锅的温度没达标——所以现在我每次灭菌后都要在试剂瓶上贴红色”已灭菌”标签，日期、操作者姓名写得清清楚楚。

耗材方面，移液枪头、离心管、培养皿这些得提前摆到超净台边缘。移液枪头盒要打开但不拆包装，避免落灰；培养皿要倒扣着放，防止冷凝水掉进去。我还有个习惯：操作前把移液枪调到常用量程（比如100μL），按一按推杆试试松紧——有回枪头没卡紧，吸液时液体”滋”地喷出来，把刚涂好的平板毁了，现在每次都要”咔嗒”确认枪头卡到位才放心。

1.3个人防护：把自己变成”无菌人”

穿实验服不是走过场，得把袖口扣紧，下摆塞进裤子里——有回袖口松着，弯腰时碰到了酒精灯火焰，布料”刺啦”冒了个洞，吓出我一身冷汗。口罩要选医用外科级别的，得遮住口鼻，金属条压实鼻梁；手套我一般戴两双，外层丁腈手套操作，内层乳胶手套防过敏。头发必须扎进帽子里，耳环、项链这些首饰坚决不戴——有次没摘耳钉，转身时刮翻了试剂管，里面的菌液溅了一袖子，当天洗了三遍实验服。

准备完这些，我会站在超净台前深吸一口气：“好了，该请主角上场了。”

二、操作中：像绣花一样稳——每一步都有”暗桩”

2.1无菌操作：和空气抢”纯净”

超净台的紫外灯一关，我马上用酒精棉片把双手再擦一遍。点燃酒精灯时，火焰要稳定呈蓝色，太高会烧到手臂，太低灭菌效果不好。拿试管时，我习惯用小指和无名指夹住管帽，手腕像端碗一样抬着——新手常犯的错是把管帽直接放在台面，结果杂菌就趁机爬进去了。接种环灭菌最讲究：先烧环柄，再烧环体，直到整个金属丝发红，然后在火焰旁冷却3-5秒——有回太急了，刚烧完的接种环直接扎进培养基，“滋啦”一声，培养基上烫出个坑，那一块的菌全死了。

2.2样品处理：从”乱”到”有序”的艺术

处理样品是最考验耐心的。比如处理土壤样品，我会先称取10g土样，加到90mL无菌水中，放在摇床上震荡30分钟——有次摇床转速调太高，三角瓶盖子被震开了，土水混合物洒了一摇床，清理了半小时。震荡完要做梯度稀释，10?1到10??的稀释液，每一步移液枪都要换枪头。稀释10?3时，我会把枪头伸到液面下2mm，缓慢吸液，避免产生气泡——气泡里的空气会让实际吸取量不准，有次稀释液里有个大气泡，结果10??的平板上菌落数比10?3还多，明显是稀释错误。

涂布平板时，三角涂布棒要先在酒精里蘸一下，再在酒精灯上烧，等酒精烧完、涂布棒冷却后再用。涂布时手腕要像画圆一样轻推，不能太用力把培养基刮破，也不能太慢让菌液聚成小水洼——我带过的实习生小徐，第一次涂布时太紧张，手腕僵得像根木棍，结果平板上半边没涂开，半边涂得培养基都裂开了，后来我让他对着空平板练了三回”画蚊香”才过关。

2.3培养与观察：给微生物”盖房子”

培养箱的参数设置必须核对三遍。比如大肠杆菌要37℃好氧培养24小时，霉菌要28℃厌氧培养5-7天。设定温度时，我会用校准过的温度计再测一次箱内温度——有回培养箱温控器坏了，显示37℃实际只有30℃，结果大肠杆菌长得又慢又小，实验数据全废了