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乳腺癌HER2检测指南（2025版）

乳腺癌作为全球女性发病率最高的恶性肿瘤，其分子分型指导下的精准治疗已成为临床共识。人表皮生长因子受体2（HER2）作为重要的分子标志物，其状态检测直接影响治疗方案选择及预后评估。随着检测技术的进步与临床研究的深入，2025版乳腺癌HER2检测指南在继承以往规范的基础上，结合最新循证医学证据与技术进展，对检测流程、方法学标准、质量控制及临床应用等关键环节进行了系统性更新，旨在为临床提供更精准、可操作的实践指导。

一、检测前规范：从标本采集到预处理的全流程质控

准确的HER2检测结果依赖于从标本采集到实验室处理的全链条规范操作。首先，标本类型需根据临床需求选择，包括手术切除标本、空心针穿刺活检标本（CNB）及细胞学标本（如细针穿刺细胞学，FNA）。对于新辅助治疗前的基线检测，优先推荐手术切除标本或CNB标本；若仅能获取FNA标本，需确保细胞量充足（至少200个肿瘤细胞）且保存状态良好。

标本固定是影响检测结果的关键环节。所有标本应在离体30分钟内浸入10%中性缓冲福尔马林（NBF）固定，固定液体积需为标本体积的10倍以上。固定时间需严格控制：手术切除标本固定6-72小时（最佳12-48小时），CNB标本固定6-48小时（最佳12-24小时），FNA标本（细胞块）固定4-24小时（最佳6-12小时）。固定不足（6小时）可能导致抗原表位未充分交联，引发IHC假阴性；固定过度（72小时）则可能造成抗原过度交联或降解，影响IHC和FISH结果的准确性。

标本处理阶段，病理医师需在固定后24小时内完成取材，避免长时间放置导致组织自溶。对于手术标本，应选取肿瘤细胞丰富区域（肿瘤占比≥50%），避开坏死、出血及纤维化区域；CNB标本需确保每根芯针包含至少5mm的肿瘤组织；FNA细胞块需通过HE染色确认肿瘤细胞数量（≥200个）及分布均匀性。组织切片厚度推荐4-5μm，过薄（3μm）可能导致FISH信号丢失，过厚（6μm）则影响IHC染色均匀性。切片需在60℃烤片30-60分钟，避免脱片同时防止抗原破坏。

二、检测方法学：IHC与FISH的核心地位及新兴技术的补充应用

目前，免疫组织化学（IHC）与荧光原位杂交（FISH）仍是HER2检测的金标准组合，2025版指南进一步明确了两者的适用场景与判读标准。

（一）IHC检测规范

IHC通过检测HER2蛋白表达水平评估其状态，推荐使用经过验证的单克隆抗体（如4B5、SP3）。检测流程包括脱蜡、水化、抗原修复、一抗孵育、二抗显色及复染。抗原修复是关键步骤，需采用高温高压法（pH6.0柠檬酸盐缓冲液，121℃5分钟）或微波修复（pH9.0EDTA缓冲液，95℃20分钟），修复不足或过度均会导致结果偏差。一抗孵育时间需严格按试剂说明书执行（通常30-60分钟），避免过短（信号弱）或过长（非特异性染色）。

IHC结果判读需在光学显微镜下完成，聚焦于浸润性癌细胞的细胞膜染色强度及阳性细胞比例。判读标准如下：

-IHC0：无染色或≤10%的肿瘤细胞呈现微弱/不完整的膜染色；

-IHC1+：10%的肿瘤细胞呈现微弱/不完整的膜染色；

-IHC2+：10%的肿瘤细胞呈现弱到中等强度的完整膜染色，或≤10%的肿瘤细胞呈现强完整膜染色；

-IHC3+：10%的肿瘤细胞呈现强且完整的膜染色（环绕细胞膜的连续环状染色）。

（二）FISH检测规范

FISH通过检测HER2基因拷贝数（HER2/CEP17比值或HER2绝对拷贝数）确认IHC2+病例的状态，同时可作为IHC0/1+病例的补充检测（如临床高度怀疑HER2阳性时）。检测流程包括脱蜡、胃蛋白酶消化、变性、杂交、洗涤及复染。胃蛋白酶消化时间需根据组织固定时间调整（固定6-24小时消化5-10分钟，固定24-48小时消化10-15分钟），消化不足导致探针无法穿透，消化过度则破坏细胞核结构。杂交需在严格控温的杂交仪中进行（37℃16-20小时），避免温度波动影响杂交效率。

FISH结果判读需在荧光显微镜下计数至少20个非重叠、无重叠的浸润性癌细胞核的HER2信号（红色）与CEP17信号（绿色）。判读标准如下：

-阳性：HER2/CEP17比值≥2.0，且HER2拷贝数≥4.0信号/细胞（若比值≥2.0但HER2拷贝数4.0，需计数50个细胞确认）；或HER2拷贝数≥6.0信号/细胞（无论比值如何）；

-阴性：HER2/CEP17比值2.0且HER2拷贝数4.0信号/细胞；

-不确定：HER2/CEP17比值1.8-2.2且HER2拷贝数4.0-6.0信号/细胞（需重复检测或结合其他方法）。

（三）新兴技术的补充应用