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烯烃介导的生物正交反应：从机制、应用到前沿拓展

一、引言

1.1生物正交反应概述

生物正交反应，作为化学生物学领域的关键技术，自问世以来便引发了科研界的广泛关注。这一概念由美国化学家C.R.贝尔托齐于2003年首次提出，它指的是能够在生物体系和生理条件下高效进行，且不干扰天然生理过程的化学反应。这类反应通常包含两个组分的化学分子，被称为生物正交反应对。在生理条件下，该反应对既能相互发生化学反应，又对生物体系中周围的分子保持惰性。

生物正交反应的发展历程是一部不断创新与突破的历史。其开发可追溯至20世纪90年代，贝尔托西课题组为解决糖质标记难题，发展了非天然糖代谢标记技术，将含有生物正交反应基团的单糖代谢整合到糖质中，再利用生物正交反应连接荧光探针，实现糖质特异性标记和观测。1997年，他们运用醛酮和酰肼的偶联反应对细胞表面的唾液酸化糖质进行化学标记，但该反应需酸性条件，不利于活细胞标记。1998年，叠氮和三苯基膦之间的施陶丁格连接反应被开发出来，这是第一个生物正交反应。2000年，贝尔托西利用叠氮化物成功将荧光分子与引入聚糖中的叠氮化物连接。2004年，“环张力促进的叠氮-炔环加成”（SPAAC）反应被提出，该反应利用环状炔烃本身的高环张力，在无铜催化剂参与下进行叠氮-炔环加成反应。此后，一系列更为快速高效的生物正交反应不断涌现，极大地丰富了生物体系中生物大分子的连接和修饰方法。

生物正交反应之所以如此重要，是因为它为研究生物分子的功能和相互作用提供了强大的工具。在生命科学研究中，我们常常需要对生物分子进行标记、追踪和修饰，以深入了解它们在生物体内的行为和作用机制。然而，传统的化学反应往往难以在复杂的生物体系中进行，因为生物体内的环境非常复杂，存在着大量的生物分子和化学反应，这些都可能干扰传统化学反应的进行。而生物正交反应则能够在这样的复杂环境中特异性地发生，不会对生物体内的正常生理过程产生干扰，从而为我们提供了一种在生理条件下研究生物分子的有效手段。

一个化学反应若要被称为生物正交反应，需满足一系列严格的条件和准则：

选择性：反应必须能够高度选择性地区分反应的官能团，确保不与生物体内源的众多官能团发生副反应。在生物体内，存在着各种各样的官能团，如羟基、氨基、羧基等，生物正交反应对必须能够精准地识别并只与特定的反应基团发生作用。

生物惰性：反应产物不能对天然体系内的化学功能造成任何干扰。生物体内的化学过程非常精密，任何外来物质的干扰都可能导致生理功能的异常。因此，生物正交反应的产物必须对生物体的正常代谢、信号传导等过程没有负面影响。

化学惰性：反应产物的化学结构必须稳定，不能被生理环境或过程所破坏。生理环境中的温度、pH值、酶等因素都可能对化学物质产生影响，生物正交反应的产物需要在这样的环境中保持稳定，以确保反应的有效性和可检测性。

反应动力学：反应速率必须足够快速，以避免反应原料在还没反应之前就被生物体代谢或者清除。在生物体内，物质的代谢速度通常较快，如果反应速率过慢，反应物可能在未发生反应前就被排出体外或被代谢分解。更快的反应速率也有助于精确地追踪生物体内瞬息万变的动态过程。

生物相容性：反应能够在生理条件下，即常温、中性pH、水相缓冲液中顺利进行。生物体内的温度和pH值相对稳定，且大部分化学反应都在水溶液环境中发生，因此生物正交反应必须适应这样的条件。

可操作性：含有生物正交反应官能团的探针能够通过代谢标记或蛋白质工程的方法被引入生物体系作为反应把手，一般而言，官能团需要足够小，以便能够顺利地进入生物体系并与目标分子结合，同时不会对生物分子的结构和功能产生显著影响。

在众多生物正交反应类型中，包括施陶丁格（Staudinger）连接反应，这是对传统施陶丁格反应的改进，带有亲电基团的三苯基膦与叠氮官能团发生反应，形成连接产物；铜催化的叠氮-炔环加成反应（CuAAC），以一价铜为催化剂，在叠氮官能团与炔基之间发生快速的[3+2]环加成反应，不过一价铜的毒性限制了其在许多细胞内体系的应用；无铜催化的叠氮-炔环加成反应，又称环张力促进的叠氮-炔环加成反应，在叠氮官能团与环辛炔衍生物之间发生环加成反应；其他1,3-偶极子的环加成反应，如硝酮与环辛炔或者氧化腈和降冰片烯之间的反应；逆电子需求的狄尔斯-阿尔德环加成反应（invDA），是发生在四嗪与反式环辛烯或者其他环张力的烯烃之间的环加成反应，是反应速率最快的一类生物正交反应；以及四唑的光点击化学反应，在光催化下发生四唑与端烯进行的1,3-偶极子机理的环加成反应。这些反应的速率差异较大，其反应速率常数范围在10-3～105升/（摩?秒）数量级，由于反应速率、官能团的大小、合成难度等方面存在差