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尿培养标准操作程序

一、目的与意义

二、适用范围与职责

本程序适用于所有临床微生物学实验室从事尿培养检测的技术人员。实验室负责人需确保所有操作人员均经过本程序的培训并考核合格。操作人员应严格遵守本程序，对操作过程及结果负责，并做好相关记录。质量控制人员需定期对本程序的执行情况进行监督与评估。

三、原理概述

尿培养的基本原理是将可能含有病原菌的尿液标本接种于适宜的培养基上，在一定的温度和时间条件下进行孵育，使存活的细菌（或真菌）生长繁殖形成肉眼可见的菌落。通过对菌落形态、数量的观察，结合革兰染色、生化反应等方法进行菌种鉴定，并进一步通过药敏试验测定病原菌对各种抗菌药物的敏感性，从而为临床提供病原学诊断和治疗参考。

四、操作程序

（一）标本采集前准备与指导

1.患者教育与指导：操作人员或医护人员需向患者详细解释标本采集的目的、意义及正确方法，强调清洁的重要性以避免污染。指导患者洗手。

2.采集容器：使用无菌、带密封盖、广口、容积适宜（通常至少能容纳几十毫升）的一次性塑料尿杯。容器应无抑菌剂、防腐剂，并贴有清晰的标签区域。

3.采集时间：理想情况下，宜采集清晨第一次尿液，此时尿液在膀胱内停留时间较长，病原菌浓度较高。若无法采集晨尿，应确保尿液在膀胱内停留至少几小时。

（二）标本采集方法

1.清洁中段尿（推荐方法）：

*女性患者：嘱咐患者分开双腿，用肥皂水或专用湿巾（一般为不含抗菌成分的碘伏或氯己定湿巾）从前向后依次清洁尿道口周围、大阴唇。清洁时应弃去使用过的湿巾。清洁后，用无菌干棉球或纸巾擦干。然后，让患者自行排尿，弃去前段尿液，留取中间一段尿液约10-20毫升于无菌容器中。盖紧盖子。

*男性患者：嘱咐患者翻转包皮（如有），暴露尿道口。用肥皂水或专用湿巾清洁尿道口及其周围。清洁后，用无菌干棉球或纸巾擦干。然后，让患者自行排尿，弃去前段尿液，留取中间一段尿液约10-20毫升于无菌容器中。盖紧盖子。

2.其他特殊采集方法：如导尿管采集（非留置导尿管）、耻骨上膀胱穿刺等，需由医护人员操作，严格无菌，并在申请单上注明采集方式。

（三）标本标记、运输与保存

1.标本标记：立即在容器标签上清晰、准确地填写患者姓名、唯一标识号、标本类型（如“清洁中段尿”）、采集日期和时间。确保标签与申请单信息完全一致。

2.标本运输：采集后的尿液标本应尽快（通常在1小时内）送往实验室。若无法及时送检，应将标本置于2-8℃冷藏保存，但冷藏时间不宜超过数小时。冷藏保存可能会影响某些苛养菌的活力，因此尽早处理是关键。运输过程中避免剧烈震荡和温度剧烈变化。

3.标本拒收标准：对以下情况的标本应考虑拒收：标签不清或信息不全；容器破损或渗漏；标本量不足（难以进行必要的检测）；明显污染（如混有粪便、卫生纸等）；送检延迟且未按规定冷藏或冷藏时间过长；采集方法不当（如未使用无菌容器）。拒收标本需及时与临床沟通，并记录原因。

（四）标本接收与处理

1.标本核对：实验室接收人员核对标本标签与申请单信息是否一致，检查标本容器是否完好，标本量是否充足，有无明显污染迹象，记录接收时间和标本状态。

2.标本混匀：处理前，将尿液标本充分混匀，但应避免剧烈震荡产生过多泡沫。

3.标本离心（必要时）：对于外观澄清、疑似菌量极少的标本，可考虑离心浓缩（通常转速为几千转每分钟，离心时间几分钟），取沉淀接种以提高检出率。但常规标本一般无需离心。

（五）接种与培养

1.培养基选择：

*primary平板：通常包括血琼脂平板（BAP）和麦康凯琼脂平板（MAC）或伊红美蓝琼脂平板（EMB）。血平板用于分离大多数需氧和兼性厌氧菌，麦康凯/伊红美蓝平板用于选择性分离革兰阴性杆菌，尤其是肠杆菌科细菌。

*特殊情况：根据临床需求或标本来源（如疑似真菌感染），可增用巧克力琼脂平板（用于分离苛养菌如奈瑟菌属）、沙保弱葡萄糖琼脂平板（用于真菌培养）等。

2.接种量与方法：

*定量接种：推荐使用标准接种环（如直径为几毫米，容量为几微升的接种环）或定量加样器进行接种，以实现菌落计数。用灭菌接种环蘸取混匀的尿液，在血平板和麦康凯平板上分别进行划线分离（如四区划线法），以获得单个菌落。

*半定量接种：对于快速筛查或资源有限情况，也可采用蘸取标本后在平板上划线的方式，但定量结果不如标准接种环准确。

3.培养条件：将接种后的平板倒置（防止冷凝水滴落污染菌落），置于35-37℃孵育箱中培养。大多数尿致病菌在需氧或兼性厌氧条件下生长良好，因此常规孵育无需额外提供CO2或厌氧环境，除非怀疑有苛养菌。

4.培养时间：一般培养18-24小时后观察结果。若为阴性，可延长培养至48小时后再次观察，以防漏检生长缓慢的菌株。

（六）菌落计数与初步识别

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