醛基琼脂糖凝胶作为酶固定化稳定载体研究.pdfVIP

醛基琼脂糖凝胶作为酶固定化‑稳定的活化载体

JoseM.Guisán

西班牙马德里市塞拉诺119号，西班牙国家研究催化与石油化学，：28006

（收稿日期：；修订日期：）

提出将适度分离于载体表面的醛基作为适合的活性基团，用于通过多点共价连接

到预活化的载体上实现酶的不溶化‑稳定化策略。本文介绍了一种含有不同表

面密度活性基团的甘油醛‑赛法罗CL凝胶的方法，−−2−，每

10002凝胶表面最多可含17个醛基残基。这些活化凝胶非常稳定，即使在中度碱

∘

性介质中也是如此，例如，在pH10、25C条件下，这些醛基的半衰期为12天。

在这些载体上进行青霉素G酰胺酶的不溶化实验表明，单点氨基‑醛基连接速度快

但相当可逆。然而，通过两点酶‑载体连接可以显著稳定酶在载体上的结合。这些

特性，以及氨基‑醛基化学反应中不存在空间位阻，使得这种活化方法非常适合设

计强烈但不的酶‑载体多相互作用过程。

：固定化；稳定化；不溶化；共价连接；glyoxylsepharoseCL凝胶

引言

酶与支持物的多点连接可能对不溶化酶衍生物产生重要的稳定作用，这一观点普

遍被提及。这些“更刚性”的酶分子必须比相应的未修饰酶分子更能抵抗由热和

引起的构象变化。这一理念在共聚酶（CE）的情况下得到了成功的实践，

尽管在酶在预存在的支持物上的不溶化（EIPS）方面，其成功程度较低。然而，

从实际角度来看，EIPS比CE具有明显的优势，例如使用刚性和耐久的支持物、

更容易表征和改进这些支持物、不溶化酶的更简单温和，以及扩散限制较小。

现在简要讨论在EIPS情况下选择合适的不溶化/稳定系统时必须考虑的主要

方面。显然，一个合适的系统是具有很好的可能性获得非常酶‑支持多点连

接的系统。

Aldehyde-agarosegelsasactivatedsupportsfor

immobilization-stabilizationofenzymes

JoseM.Guisán

InstitutodeCatálisisyPetroleoquímica,C.S.I.C.,Serrano119,28006Madrid,Spain

(Received24March1987;revised19November1987)

Aldehydegroups,moderatelyseparatedfromsupportsurfaces,areproposedassuitable

activegroupsfordevelopingstrategiestoinsolubilize-stabilizeenzymesbymultipoint

covalentattachmenttoactivatedpreexistentsupports.Amethodforpreparationof

glyoxyl-SepharoseCLgels,−−2−,withverydifferentsurfacedensities

ofactivegroups,upto17aldehyderesiduesper10002ofgelsurface,ispresented.

Theseactivatedgelsareverystable,eveninmoderatelyalkalinemedia,e.g.,half-life

∘

timeofthesealdehydegroupsatpH10,25C,is12days.Experimentsof

insolubilizationoftheenzymePenicillinGacylaseonthesesupportsindicatethatone

pointamine-aldehydeattachmentsarefastbutquitereversible.However,thebindin