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感染性疾病血清学诊断技术指南（2025年版）

感染性疾病血清学诊断技术通过检测患者血清（或血浆）中病原体特异性抗体或抗原，为感染性疾病的诊断、病程评估及流行病学调查提供关键依据。本指南基于当前循证医学证据、技术发展及临床需求，系统规范血清学检测全流程，涵盖技术原理、检测方法、质量控制、结果解读及特殊场景处理等核心内容。

一、技术原理与方法学分类

血清学诊断的核心是抗原-抗体的特异性结合反应，其生物学基础包括抗体的类别（IgM、IgG、IgA等）、亲和力成熟及动态变化规律。根据检测目标，可分为抗体检测（IgM/IgG/IgA）和抗原检测两类；按技术平台，主要包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、化学发光免疫分析（CLIA）、胶体金免疫层析（GICA）、免疫荧光试验（IFA）及凝集试验等。

（一）抗体检测原理

1.IgM抗体：感染早期（通常3-7天）产生，半衰期短（约5天），是急性或近期感染的重要指标，但需注意类风湿因子（RF）等干扰可能导致假阳性。

2.IgG抗体：感染后7-14天产生，持续时间长（数月至数年），高滴度或双份血清（急性期与恢复期间隔10-14天）滴度4倍及以上升高可确认近期感染，低滴度提示既往感染或疫苗接种。

3.IgA抗体：主要存在于黏膜局部（如呼吸道、消化道），血清中含量较低，常用于特定病原体（如轮状病毒、幽门螺杆菌）的黏膜免疫评估。

（二）抗原检测原理

直接检测病原体特异性抗原（如HBsAg、PCT、隐球菌荚膜抗原），反映病原体存在状态，适用于窗口期（抗体未产生时）或慢性感染（抗体水平低时）的辅助诊断。其灵敏度受抗原浓度、检测方法灵敏度及样本类型影响，需结合临床症状综合判断。

（三）主要技术平台特点

-ELISA：经典方法，可定量或半定量，操作需洗板、显色步骤，适合批量检测；缺点是耗时（2-4小时），易受操作误差影响。

-CLIA：灵敏度高（可达pg/mL级）、线性范围宽、自动化程度高，适合定量检测（如HIV抗体、HBsAb），但设备及试剂成本较高。

-GICA：快速（15-30分钟出结果）、操作简便、无需仪器，适用于基层或床旁检测（如流感病毒抗原、疟原虫抗原），但多为定性或半定量，灵敏度低于CLIA。

-IFA：通过荧光标记抗体显示抗原位置，可观察病原体形态（如抗核抗体、军团菌抗体），但需荧光显微镜，结果判读依赖经验。

-凝集试验：包括直接凝集（如肥达试验）、间接凝集（如梅毒RPR试验），操作简单、成本低，但易受非特异性凝集干扰。

二、检测流程与质量控制

（一）样本采集与处理

1.样本类型：首选血清（无抗凝剂），避免溶血（血红蛋白＞500mg/L可干扰酶反应）、脂血（甘油三酯＞10mmol/L可致假阳性）及黄疸（胆红素＞100μmol/L可抑制显色）。血浆需使用EDTA或肝素抗凝（避免枸橼酸盐，可能影响钙依赖的抗原-抗体反应）。

2.采集时间：抗体检测需根据病原体潜伏期确定：急性感染期（症状出现后3-7天）采急性期血，恢复期（2-4周后）采恢复期血；抗原检测应在症状出现后尽早采集（如流感抗原在症状出现48小时内阳性率最高）。

3.保存与运输：血清/血浆采集后2小时内分离，4℃保存不超过72小时；需长期保存（＞72小时）应-20℃冻存（避免反复冻融，否则IgM易降解）。运输时需用冰袋维持2-8℃，避免剧烈震荡。

（二）实验室操作规范

1.试剂管理：选择经国家药品监督管理局（NMPA）批准或欧盟CE认证的试剂，核对有效期及批号，不同批号试剂不得混用。每批新试剂使用前需进行性能验证（灵敏度、特异度、重复性）。

2.仪器校准：自动化设备（如化学发光仪）需定期（至少每6个月）进行校准，使用配套校准品；洗板机需检测加液量（误差≤5%）、洗板残留量（≤5μL/孔）。

3.操作步骤：严格按说明书执行，注意孵育时间（误差±5%）、温度（37℃±1℃）及洗板次数（漏洗或过度洗板均可导致假阳性/假阴性）。手工操作时，加样量需使用移液器（精度≤2%），避免气泡影响结果。

（三）质量控制体系

1.室内质控（IQC）：每批次检测需加入高、中、低浓度质控品（覆盖临界值附近），质控品应与患者样本同步检测。质控规则采用Westgard多规则（如12s警告、13s失控、22s系统误差），失控时需立即查找原因（试剂失效、仪器故障、操作错误），重新检测并记录处理过程。

2.室间质评（EQA）：每年至少参加2次国家级或省级室间质评，结果需符合“满意”标准（如靶值±20%）。未通过时需分析偏差原因（方法学差异、校准错误），并制定改进措施。

3.人员培训：检测人员需经岗位培训（理论+实操），考核合格后方可独立操作。每年度复训，重点强化新方法（如多重荧光免疫