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呼吸内科结核感染T细胞斑点试验（T-SPOT）知情同意书

一、检查目的与意义

结核感染T细胞斑点试验（T-SPOT.TB）是基于结核分枝杆菌特异性抗原（如早期分泌抗原靶-6（ESAT-6）和培养滤液蛋白-10（CFP-10））刺激外周血中效应T淋巴细胞，通过检测γ-干扰素（IFN-γ）分泌情况辅助判断结核分枝杆菌感染状态的免疫学检测方法。本检查的核心目的包括：

1.辅助诊断结核分枝杆菌潜伏感染（LTBI）或活动性结核（ATB），尤其适用于卡介苗（BCG）接种史阳性或非结核分枝杆菌感染人群的鉴别；

2.为临床评估结核感染风险提供依据（如免疫抑制治疗前、结核密切接触者筛查等）；

3.结合临床症状、影像学及其他实验室检查（如痰涂片、结核菌素试验（PPD）、结核分枝杆菌核酸检测等），提高结核诊断的准确性，减少漏诊或误诊。

二、检查原理与技术特点

人体感染结核分枝杆菌后，特异性T淋巴细胞会识别并记忆结核分枝杆菌的特异性抗原（如ESAT-6、CFP-10，此类抗原通常不存在于BCG及大多数非结核分枝杆菌中）。当外周血单个核细胞（PBMC）与上述抗原共孵育时，曾被结核分枝杆菌致敏的T淋巴细胞会分泌IFN-γ，形成肉眼可见的斑点（每个斑点对应一个分泌IFN-γ的T细胞）。通过酶联免疫斑点技术（ELISPOT）计数斑点数量，可判断是否存在结核分枝杆菌感染。

技术特点：

-特异性高：因ESAT-6、CFP-10抗原不表达于BCG及大多数非结核分枝杆菌，可避免卡介苗接种或非结核分枝杆菌感染导致的假阳性；

-敏感性稳定：受患者免疫状态影响较小（如HIV感染者、糖尿病患者等免疫功能低下人群仍可能检测到阳性结果）；

-结果量化：通过斑点计数（SFC/10?PBMC）提供客观数据，减少主观判断误差。

三、适用人群与禁忌人群

（一）适用人群（满足以下任意一项即可）

1.临床怀疑活动性结核（如咳嗽、咳痰≥2周，伴或不伴咯血、低热、盗汗等症状，影像学提示结核特征性病变）；

2.结核分枝杆菌潜伏感染筛查（如结核患者密切接触者、准备接受生物制剂/免疫抑制剂治疗的患者、HIV感染者等免疫抑制人群）；

3.卡介苗接种后PPD试验阳性者的鉴别诊断（需排除卡介苗诱导的假阳性）；

4.非结核分枝杆菌感染与结核分枝杆菌感染的鉴别（如慢性呼吸道疾病患者反复痰培养检出分枝杆菌，需明确是否为结核分枝杆菌）。

（二）禁忌人群（存在以下情况时需谨慎评估或暂缓检查）

1.严重凝血功能障碍（如血友病、血小板计数＜50×10?/L）或正在接受抗凝治疗（如华法林、新型口服抗凝药），可能增加采血部位出血风险；

2.急性感染期（如发热＞38.5℃、严重细菌/病毒感染），可能因免疫系统激活导致非特异性IFN-γ分泌，影响结果准确性；

3.妊娠中晚期（无明确证据表明检查对胎儿有害，但需结合临床必要性综合评估）；

4.外周血白细胞严重减少（如中性粒细胞＜1.0×10?/L）或PBMC分离困难（如严重贫血、白血病等），可能导致样本质量不达标，无法完成检测。

四、操作流程与时间安排

1.检查前准备：无需严格空腹，但建议避免剧烈运动（可能导致血液成分波动）；正常饮食、饮水不影响结果；若近期使用免疫调节剂（如糖皮质激素、TNF-α抑制剂），需提前告知医生，可能需调整检查时间（一般建议停药2-4周后检测，具体以临床医生评估为准）。

2.样本采集：采集外周静脉血5-8ml（使用肝素抗凝管或无抗凝剂分离胶管，具体以实验室要求为准），采血过程约2-5分钟，与常规静脉采血操作一致。

3.样本处理：采血后需在4小时内完成PBMC分离（若无法及时处理，需4℃保存并在24小时内完成分离），避免因细胞活性下降导致结果假阴性。

4.检测步骤：分离的PBMC与阴性对照（无抗原刺激）、阳性对照（植物血凝素PHA刺激）及结核特异性抗原（ESAT-6、CFP-10）共孵育16-20小时；洗板后加入酶标二抗，通过显色反应形成斑点；使用ELISPOT读数仪计数斑点数量。

5.结果报告：通常于采血后3-5个工作日出具报告（具体时间以检测机构实验室流程为准）。

五、可能的风险与不适

本检查为体外免疫学检测，主要风险来自静脉采血过程，具体包括：

1.常见轻微不适（发生率约5%-10%）：采血部位短暂疼痛、局部淤血（按压不当可能导致）、轻微肿胀，通常1-3天内自行缓解；

2.罕见不良反应（发生率＜0.1%）：晕血或晕针（表现为头晕、恶心、出汗，平卧休息后可恢复）、采血部位感染（严格无菌操作下罕见，若出现红肿热痛需及时就医）；

3.检测结果的局限性：

-阳性结