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骨科干细胞治疗临床应用指南

骨科干细胞治疗是基于干细胞多向分化潜能、免疫调节及旁分泌作用的再生医学技术，主要应用于骨与软骨损伤、骨不连、骨质疏松性骨折等难治性骨科疾病。本指南基于循证医学证据及临床实践经验，针对干细胞治疗的全流程提供规范化操作指导，涵盖治疗前评估、技术实施、术后管理及疗效评价等核心环节。

一、治疗前评估规范

（一）患者入选标准与排除标准

适用疾病范围：需经严格临床诊断确认的以下疾病：①长骨骨缺损（缺损长度＞5cm或体积＞10cm3，常规植骨治疗失败）；②创伤或退变性软骨损伤（Outerbridge分级Ⅲ-Ⅳ级，面积＞2cm2）；③骨折延迟愈合或不愈合（X线显示骨折端无骨痂形成超过3个月，排除感染性骨不连）；④重度骨质疏松性椎体压缩骨折（骨密度T值≤-3.5，经抗骨质疏松治疗后仍反复骨折）；⑤股骨头坏死（ARCO分期Ⅱ-Ⅲ期，未出现明显塌陷或塌陷＜2mm）。

排除标准：①恶性肿瘤病史（5年内或未控制的现症肿瘤）；②活动性感染（局部或全身感染未控制）；③严重凝血功能障碍（国际标准化比值＞1.5或血小板计数＜50×10?/L）；④免疫缺陷病（如HIV感染、原发性免疫缺陷）；⑤妊娠或哺乳期女性；⑥精神疾病无法配合治疗者。

（二）多维度评估体系

1.临床评估：详细采集病史（损伤时间、治疗史、合并症如糖尿病/类风湿关节炎）、疼痛评分（VAS评分≥4分）、关节功能评分（如膝关节采用Lysholm评分＜60分，髋关节采用Harris评分＜70分）。重点记录患肢活动度、肌力及神经功能状态。

2.影像学评估：

-骨缺损/骨不连：需行三维CT重建（层厚≤1mm），测量缺损体积（Mimics软件计算）、骨折端硬化情况及髓腔封闭程度；

-软骨损伤：采用3.0TMRI（T2mapping序列）评估软骨厚度（＜2mm提示全层损伤）、信号强度（T2值＞80ms提示软骨基质破坏）及软骨下骨水肿范围（面积＞2cm2提示进展风险）；

-股骨头坏死：MRIT1加权像显示低信号带，T2加权像“双线征”阳性，结合CT评估塌陷程度（Meyer分型）；

-骨质疏松性骨折：DXA检测腰椎及股骨颈骨密度（T值≤-2.5），胸腰椎侧位X线评估椎体压缩程度（前缘高度丢失＞20%）。

3.实验室评估：

-常规检查：血常规（白细胞计数＞10×10?/L或＜3.5×10?/L需排查感染/骨髓抑制）、肝肾功能（ALT/AST＞2倍正常值上限或肌酐＞176.8μmol/L需调整方案）、凝血功能（PT/APTT延长＞3秒需纠正）；

-炎症指标：CRP＞10mg/L或ESR＞20mm/h需排除感染；

-免疫功能：CD4?T细胞计数＜500/μl（同种异体干细胞治疗禁忌）、免疫球蛋白水平（IgG＜6g/L提示免疫低下）；

-干细胞质量预评估（自体来源）：采集前检测骨髓单个核细胞计数（＜1×10?/ml提示骨髓功能减退，需调整采集量）。

二、干细胞制备与质量控制

（一）干细胞来源选择

1.自体干细胞：优先用于免疫功能正常患者（如年轻骨缺损、软骨损伤），来源包括骨髓（BMSC）、脂肪（ADSC）。骨髓采集推荐髂后上棘（单侧采集量30-50ml，避免穿透皮质），脂肪采集选择腹部或大腿（吸脂量50-100ml，避免混入血液）。

2.同种异体干细胞：适用于自体干细胞质量差（如老年骨质疏松、骨髓纤维化）或多次自体治疗无效者，供体需满足：①18-35岁健康志愿者；②无传染性疾病（HIV、HBV、HCV、梅毒血清学阴性）；③血常规、肝肾功能正常；④遗传学筛查（无染色体异常及单基因遗传病家族史）。

（二）分离、培养与扩增

1.自体干细胞处理：

-骨髓：采用密度梯度离心法（Ficoll密度1.077g/ml，2000rpm离心20分钟），收集界面层单个核细胞，PBS洗涤2次后计数（目标浓度1×10?-5×10?/ml）；

-脂肪：胶原酶消化（0.1%Ⅰ型胶原酶37℃振荡30分钟），离心（1200rpm×10分钟）去除油脂及消化液，原代培养采用α-MEM培养基（含10%自体血清），传代至P2-P3代（避免过度扩增导致干性丢失）。

2.同种异体干细胞处理：

-需在GMP实验室完成，原代细胞分离后进行表型鉴定（CD73?/CD90?/CD105?≥95%，CD34?/CD45?≤2%），检测三系分化能力（成骨诱导21天茜素红染色阳性，成脂诱导14天油红O染色阳性）；

-扩增至P4代以内，每代检测微生物（细菌/真菌培养阴性，内毒素＜0.5EU/ml）及