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色層分析法一、分類1.吸附薄層層析吸附薄層層析的原理同吸附柱層析。根據吸附劑對各種化合物吸附能力的強弱不同，在吸附劑和展開劑中吸附和解吸的差異，使樣品中各物質以不同的速度移動，最後達到分離。吸附薄層層析主要用於脂溶性物質的分離，但也能分離水溶性物質。2.分配薄層層析分配薄層層析的原理同紙上層析。是以所吸收的水或其他溶劑作為固定相，以適當的溶劑作為流動相來展開，由於樣品中各物質在兩相中分配係數不同，從而得到分離。分配薄層層析適用於水溶性物質的分離，對於脂溶性物質則可用反相薄層層析進行分離。色層分析法3.離子交換薄層層析離子交換薄層層析的原理同離子交換柱層析。一般用離子交換進行維維素來製備薄層板，可用來分離某些親水性強的化合物，如核苷酸。4.其他如用凝膠（如交聯葡萄聚糖凝膠）作為薄層材料，稱為“凝膠層析”，它能起分子篩的作用，適於分離一些高分子化合物，如蛋白質、酶和多糖等。色層分析法二、操作方法與操作條件的選擇在薄層層析中，吸附劑與支持劑往往不能截然區分，在某此情況下，同一物質即可作為吸附劑，又可作為支持劑。1.吸附劑的選擇用於薄層層析的吸附劑要求不應溶於水及有機溶劑，並具有一定的吸附能力，能使樣品混合物得到良好的分離效果，其顆粒應具有一定大小。吸附劑的吸附能力強弱不僅決宇於吸附劑本身，還和下列因素有關：①吸附能力（即活性）隨水分增加而降低。②與被測物質的化學結構有關。色層分析法2.常用的吸附劑①矽膠：矽膠能吸附脂溶性物質，也能吸附水溶性物質。由於它是略帶酸性的吸附劑，故適於分離酸性及中性的物質。其粒度200-250目。②氧化鋁：氧化鋁的吸附能力比矽膠強，它是略帶鹼性的吸附劑，適於分離鹼性物質或用於矽膠不能分離的中性物質。層析用的氧化鋁一般為200-300目，粘合力強，可以制軟板，也可以制硬板。③聚醯胺：其優點是具有極大的吸附能力，適於帶羥基化合物的分離。用於薄層的聚醯胺粉末，其顆粒大小為0.1-0.2毫米，即70-140目。色層分析法3.支持劑的選擇用於分配薄層的支持劑應該是惰性的，沒有吸附力的，但要能吸留較大量的固定相液體。①纖維素：薄層層析用纖維素是長為2-20微米的短纖維，顆粒為70-140目。它有兩種應用型式，即天然纖維與微晶纖維素。其中天然纖維素既可作為吸際劑，又可作為支持劑。而微晶纖維只能作為支持劑，適於分離水溶性的物質如糖類、氨基酸、核酸等。②矽藻土：薄層用矽藻土的顆粒大小一般為0.07毫米，它與纖維素一樣，適於分離水溶性的物質。色層分析法4.展開劑（1）選擇原則在吸附層析中，當所用吸附劑已定，則對同一化合物的解吸能力與展開劑的極性有關，極性大則洗脫能力也大，即在薄層上斑點展開距離越遠，Rf值也越大。薄層層析所用的展開劑主要是低沸點的有機溶劑，並須加以精製。一般使用2-3種組分的多元溶劑系統。對於薄層所用的展開劑的選擇原則與吸附柱層析一樣，也是根據溶劑的極性、被測物質的極性及吸附劑的活性三方面來考慮（見圖6-16）。色層分析法色層分析法（2）選擇方法①微量圓環法：將待分析的幾個樣品，用毛細管點在薄層上，兩點間距離為2-3釐米，再用毛細管將待選擇的展開劑滴到點樣處，並進行展開，乾燥後顯色，觀察樣品經展開後呈圓環狀的情況。取同心圓層次清楚，Rf值在0.5左右的溶劑再進行復試，進一步決定展開劑的取捨。②載玻片法：用普通載玻片（2.5×7.5釐米）塗上吸附劑製成薄層板，把樣品點在薄層上，放在盛有3-5毫升待試展開劑的小玻璃缸中展開5釐米，乾燥後顯色，根據顯色情況來確定展開劑的取捨，此法也適用於分配薄層。③圖解法：用硬紙或透明照相底片，按圖6-17製成一供選擇展開劑的簡便選擇器，根據被測物質的極性，將中間可轉動的三角形的一個頂端固定，然後根據其他兩個頂端所指部位，決定所選擇的吸附劑的活性與展開劑的極性。色層分析法色層分析法5.操作方法（1）薄層板的製作①軟板的製備：軟板的製備是用幹法塗布。在一根玻璃棒的兩端分別繞幾圈膠布，圈數多少視所需薄層厚度而定，一般厚度為0.5-0.75毫米，有時可達1-2毫米。然後在玻璃板下放一張大於玻璃板的紙，便於回收吸附劑或支持劑。已經活化的吸附劑或支持劑倒在玻璃板上，將玻璃板一端固定，然後用玻璃棒壓在玻璃板上，如圖6-17（1）所示，用力均衡勻速地推進，中途切勿停頓，否則薄層厚度不均勻，影響分離效果，然後再除去多餘的吸附劑或支持劑即成。另外也可用特製的塗布器塗制，見圖6-17（2）。色層分析法②硬板的製備：硬板採用濕法塗布。