体外药物代谢酶和转运体介导的药物相互作用研究技术指导原则(试行)下载.docxVIP

体外药物代谢酶和转运体介导的药物相互作用研究技术指导原则(试行)下载

药物相互作用（Drug-DrugInteraction,DDI）是影响药物安全性和有效性的重要因素，其中由代谢酶和转运体介导的DDI占临床相关DDI的70%以上。为规范体外药物代谢酶和转运体介导的DDI研究，指导药品研发、生产及监管实践，基于当前药理学、药代动力学及毒理学研究进展，结合国际通行技术要求，制定本技术指导原则。本原则适用于化学药品、治疗用生物制品中的小分子药物（如抗体偶联药物的小分子载荷部分），以及已上市药物变更（如处方工艺调整、适应症扩展）的DDI风险评估，旨在为研究者提供科学、系统的体外研究技术框架，降低临床研究风险，保障患者用药安全。

一、研究目的与基本要求

（一）研究目的

通过体外实验评估候选药物对关键代谢酶（如细胞色素P450酶系，CYP450）和转运体（如P-糖蛋白，P-gp；乳腺癌耐药蛋白，BCRP；有机阴离子转运多肽，OATP）的抑制或诱导作用，预测其与其他药物联用时发生DDI的风险，为临床用药方案设计（如剂量调整、给药间隔）、说明书修订及后续临床DDI研究提供依据。

（二）基本要求

1.实验设计的科学性：应基于药物的理化性质（如脂溶性、pKa）、药代动力学特征（如代谢途径、清除率）及作用机制，选择与体内代谢/转运过程相关性高的实验模型。需明确研究终点（如抑制常数Ki、半数抑制浓度IC50、诱导倍数），并设置合理的阳性/阴性对照（如CYP3A4抑制剂酮康唑、诱导剂利福平）。

2.实验系统的适用性：代谢酶研究推荐使用人源生物材料（如人肝微粒体、原代人肝细胞），避免使用动物来源材料（特殊情况下需提供种属差异支持性数据）；转运体研究应选择高表达目标转运体的细胞系（如HEK293转染OATP1B1细胞）或膜囊泡（如人源P-gp膜囊泡），确保转运体活性与体内生理状态一致。

3.质量控制体系：实验过程需符合药物非临床研究质量管理规范（GLP）要求，重点关注试剂（如辅酶NADPH、探针底物）的纯度与稳定性、仪器（如高效液相色谱-质谱联用仪，HPLC-MS/MS）的校准、实验重复性（同一批次至少3次独立实验，变异系数CV≤20%）及数据溯源（原始图谱、实验记录需完整保存）。

二、代谢酶介导的DDI体外研究技术要点

（一）主要研究对象

重点关注CYP450超家族中参与约90%临床药物代谢的亚型，包括CYP3A4/5、CYP2D6、CYP2C9、CYP2C19、CYP1A2及CYP2B6；其次为非CYP酶（如尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶，UGT；黄素单加氧酶，FMO），需根据药物代谢途径选择性开展。

（二）抑制作用研究

1.实验模型选择：

-可逆性抑制：优先使用人肝微粒体（HLM），因其可反映肝脏代谢微环境；对于主要经肠道代谢的药物（如CYP3A4底物），可补充人肠微粒体（HIM）实验。

-机制性抑制（时间依赖性抑制，TDI）：需采用预孵育模型（药物与肝微粒体、NADPH预孵育5-30分钟后加入探针底物），以区分可逆抑制与TDI（如CYP3A4的典型TDI抑制剂红霉素）。

2.参数测定：

-IC50测定：设置至少6个浓度（覆盖0.1-10倍预计最大血药浓度，Cmax），通过非线性回归计算IC50值。若IC50≤10×Cmax（游离药物浓度需校正蛋白结合率，fup），需进一步测定Ki（抑制常数）及Kinact（最大失活速率常数）。

-Ki测定：采用双倒数作图法（Lineweaver-Burkplot）或直接拟合米氏方程，区分竞争性、非竞争性或混合性抑制类型。Ki≤2×Cmax（游离）时，提示体内可能发生显著抑制。

3.数据验证：需排除非特异性干扰（如探针底物的荧光淬灭、质谱离子抑制），可通过更换检测方法（如放射性标记底物）或调整实验条件（如稀释样品）确认抑制作用的特异性。

（三）诱导作用研究

1.实验模型：原代人肝细胞（PHH）为金标准，因其保留完整的核受体（如孕烷X受体PXR、组成型雄甾烷受体CAR）信号通路及酶表达调控机制。需使用至少3例不同供体的肝细胞（覆盖不同种族、年龄），以评估个体差异。

2.实验设计：

-药物暴露时间：CYP450诱导需48-72小时（因mRNA转录、蛋白合成需时间），UGT诱导可能需更长时间（72-96小时）。

-浓度设置：至少3个浓度（0.1-10×Cmax），同时设置阳性诱导剂（如利福平诱导CYP3A4，奥美拉唑诱导CYP1A2）和溶剂对照（如0.1%DMSO）。

3.评价指标：

-mRNA水平：通过实时定量PCR（qRT-PCR）测定