PCR实验流程试题及解析.docVIP

PCR实验流程试题及解析

1.PCR实验中，第一步是将模板DNA加热至95℃，其目的是什么？（5分）

2.PCR反应体系中，除了模板DNA、引物、dNTP外，还需要加入哪种关键成分？（5分）

3.在PCR循环中，退火温度一般设定在多少度左右？其作用是什么？（10分）

4.简述PCR实验中延伸步骤的温度及原理。（10分）

5.PCR产物的检测方法有多种，以下哪种方法常用于定性分析？（5分）

A.凝胶电泳

B.荧光定量PCR

C.测序

6.PCR实验中，引物的设计需要考虑哪些因素？（10分）

7.如果PCR反应结果出现非特异性扩增条带，可能的原因有哪些？（10分）

8.请描述一个完整的PCR反应体系的组成及各成分的作用。（15分）

9.在PCR实验中，如何避免引物二聚体的形成？（10分）

10.PCR技术可用于哪些领域？请举例说明。（10分）

答案：

1.使模板DNA变性解链成单链，为后续引物结合提供模板。

2.TaqDNA聚合酶。

3.退火温度一般设定在55-65℃左右。作用是使引物与模板DNA单链特异性结合。

4.延伸温度一般为72℃左右。原理是在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为原料，沿着模板DNA单链从引物的3端开始合成互补链。

5.A

6.引物长度一般为18-25bp；引物的GC含量一般在40%-60%；引物自身不能有互补序