微生物限度检查法.pdfVIP

附录Ⅺ J 微生物限度检查法 微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度 的方法。检查项目包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查。 微生物限度检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空 气区域内进行。检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。单向流空气区 域、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降 菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。 供试品检查时，如果使用了表面活性剂、中和剂或灭活剂，应证明其有效性 及对微生物无毒性。 除另有规定外，本检查法中细菌及控制菌培养温度为 30℃～35℃；霉菌、 酵母菌培养温度为23℃～28℃。 检验结果以1g、1ml、10g、10ml、10cm2 为单位报告，特殊品种可以最小包 装单位报告。 检验量 2 检验量即一次试验所用的供试品量（g、ml或cm ）。 2 除另有规定外，一般供试品的检验量为 10g 或 10ml；膜剂为 100cm ；贵重 药品、微量包装药品的检验量可以酌减。要求检查沙门菌的供试品，其检验量应 增加20g或20ml（其中10g用于阳性对照试验）。 检验时，应从2个以上最小包装单位中抽取供试品，膜剂还不得少于4片。 一般应随机抽取不少于检验用量（两个以上最小包装单位）的3倍量供试品。 供试液的制备 根据供试品的理化特性与生物学特性，采取适宜的方法制备供试液。供试液 制备若需加温时，应均匀加热，且温度不应超过 45℃。供试液从制备至加入检 验用培养基，不得超过1小时。 除另有规定外，常用的供试液制备方法如下。 1.液体供试品 取供试品 10ml，加 pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至 100ml，混匀，作为 1 /27. 1∶10 的供试液。油剂可加入适量的无菌聚山梨酯 80 使供试品分散均匀。水溶 性液体制剂也可用混合的供试品原液作为供试液。 2.固体、半固体或黏稠性供试品 取供试品10g，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，用匀浆仪或其 他适宜的方法，混匀，作为1∶10的供试液。必要时加适量的无菌聚山梨酯80， 并置水浴中适当加温使供试品分散均匀。 3.需用特殊供试液制备方法的供试品 (1)非水溶性供试品 方法 1 取供试品5g（或5ml），加至含溶化的（温度不超过45℃）5g司盘 80、3g 单硬脂酸甘油酯、10g 聚山梨酯 80 无菌混合物的烧杯中，用无菌玻棒搅 拌成团后，慢慢加入 45℃的 pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至 100ml，边加边 搅拌，使供试品充分乳化，作为1∶20的供试液。 方法 2 取供试品10g，加至含20ml无菌十四烷酸异丙酯（制法见附录ⅩⅢ B无菌检查法中供试品的无菌检查项下）和无菌玻璃珠的适宜容器中，必要时可 增加十四烷酸异丙酯的用量，充分振摇，使供试品溶解。然后加入45℃的 pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液 100ml，振摇 5～10 分钟，萃取，静置使油水明显分 层，取其水层作为1∶10的供试液。 (2)膜剂供试品 取供试品 100cm2 ，剪碎，加 100ml 的 pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液（必 要时可增加稀释液），浸泡，振摇，作为1∶10的供试液。 (3)肠溶及结肠溶制剂供试品 取供试品10g，加pH6.8无菌磷酸盐缓冲液（用于肠溶制剂）或pH7.6无菌 磷酸盐缓冲液（用于结肠溶制剂）至100ml，置45℃水浴中，振摇，使溶解，作 为1∶10的供试液。 (4)气雾剂、喷雾剂供试品 取规定量供试品，置冰冻室冷冻约1小时，取出，迅速消毒供试品开启部位， 用无菌钢锥在该部位钻一小孔，