维生素A测定法.pdfVIP

附录 VII J 维生素 A 测定法 本法是用紫外-可见分光光度法（附录 IV A ）或高效液相色谱法（附录VD ） 测定维生素 A 及其制剂中维生素 A 的含量，以单位表示，每单位相当于全反式 维生素 A 醋酸酯 0.344µg 或全反式维生素 A 醇 0.300µg 。 测定应在暗室中进行。 一、紫外-可见分光光度法 由于维生素A 制剂中含有稀释用油和维生素 A 原料药中混有其他杂质，采 用紫外-可见分光光度法测得的吸光度不是维生素 A 独有的吸收。在以下规定的 条件下，非维生素 A 物质的无关吸收所引入的误差可以用校正公式校正，以便 得到正确结果。 校正公式采用三点法，除其中一点是在吸收峰波长处测得外，其他两点分别 在吸收峰两侧的波长处测定，因此仪器波长应准确，故在测定前，应对仪器波长 进行校正。 检查法 取供试品适量，精密称定，加环己烷溶解并定量稀释制成每 1ml 中含9～15 单位的溶液，照紫外－可见分光光度法（附录 IV A ），测定其吸收峰 的波长，并在下表所列各波长处测定吸光度，计算各吸光度与波长 328nm 处吸 光度的比值和波长 328nm 处的 E1％1cm 值。 波长/nm 吸光度比值 波长/nm 吸光度比值 300 0.555 340 0.811 316 0.907 360 0.299 328 1.000 如果吸收峰波长在 326～329nm 之间，且所测得各波长吸光度比值不超过表 中规定的±0.02，可用下式计算含量： 每 1g 供试品中含有的维生素 A 的单位＝E1％1cm （328nm ）×1900 如果吸收峰波长在 326～329nm 之间，但所测得的各波长吸光度比值超过表 中规定值的±0.02，应按下式求出校正后的吸光度，然后再计算含量： A328 （校正）＝3.52 （2A328 －A316 －A340 ） 1 如果在 328nm 处的校正吸光度与未校正吸光度相差不超过±3.0％，则不用 校正吸光度，仍以未经校正的吸光度计算含量。 如果校正吸光度与未校正吸光度相差在－15％至－3％之间，则以校正吸光 度计算含量。 如果校正吸光度超出未校正吸光度的－15％至－3％的范围，或者吸收峰波 长不在326～329nm之间，则供试品须按下述方法测定。 另精密称取供试品适量（约相当于维生素A总量500单位以上，重量不多于 2g），置皂化瓶中，加乙醇 30ml 与 50％（g/g）氢氧化钾溶液 3ml，置水浴中煮 沸回流30分钟，冷却后，自冷凝管顶端加水10ml冲洗冷凝管内部管壁，将皂化 液移至分液漏斗中 （分液漏斗活塞涂以甘油淀粉润滑剂），皂化瓶用水60～100ml 分数次洗涤，洗液并入分液漏斗中，用不含过氧化物的乙醚振摇提取4次，每次 振摇约 5 分钟，第一次 60ml，以后各次 40ml，合并乙醚液，用水洗涤数次，每 次约100ml，洗涤应缓缓旋动，避免乳化，直至水层遇酚酞指示液不再显红色， 乙醚液用铺有脱脂棉与无水硫酸钠的滤器过滤，滤器用乙醚洗涤，洗液与乙醚液 合并，置250ml量瓶中，用乙醚稀释置刻度，摇匀；精密量取适量，置蒸发皿内， 微温挥去乙醚，迅速加异丙醇溶解并定量稀释制成每 1ml 中含维生素 A9～15 单 位，照紫外－可见分光光度法（附录 IV A），在 300nm、310nm、325nm 与 334nm 四个波长处测定吸光度，并测定吸收峰的波长。吸收峰的波长应在 323～327nm 之间，且300nm波长处的吸光度与325nm波长处的吸光度的比值应不超过0.73， 按下式计算校正吸光度： A325 （校正）＝6.815A325 －2.555A310 －4.260A334 每 1g 供试品中含有的维生素 A 的单位＝E1％1cm （325nm，校正）×1830 如果校正吸光度在未校正吸光度的 97 ％～103％，则仍以未经校正的