不同条件对胭脂萝卜硝酸还原酶活性的影响研究.docVIP

【标题】不同条件对胭脂萝卜硝酸还原酶活性的影响研究 【作者】郝建辉 【关键词】硝酸还原酶? pH??温度??食盐浓度??底物浓度??酶浓度 【指导老师】李 敏 【专业】生物科学 【正文】1?引言1.1?胭脂萝卜的概况胭脂萝卜，别名红心萝卜（Raphnus sativus cv.），系十字花科萝卜属萝卜种，是涪陵区的三大特色产品之一，主要分布在涪陵及周边地区。胭脂萝卜含有丰富的萝卜红色素，从皮到心全身深红，组织紧密、质地脆嫩、肉质肥厚不异软化而常作泡菜。胭脂萝卜制成泡菜其味嫩脆可口，并且色泽鲜红，同时色素渗出使得泡菜液变为鲜亮的红色，使其他泡菜染为红色，而深受人们喜爱，是涪陵地区老百姓制作泡菜的重要原料之一[1]。1.2?硝酸还原酶的组成硝酸还原酶（nitrate reductase,NR,EC.1.6.6.1/2）是氮代谢过程中的一个重要的调节酶和限速酶。在植物的根和叶中都有该酶的存在，它是一种可溶性的钼黄素蛋白，由黄素腺嘌呤二核苷酸（FAD）、细胞色素b557和钼等辅助因子组成[2]。1.3?硝酸还原酶活性的影响因素硝酸还原酶对于环境条件十分敏感，如NO3-浓度、温度、pH值、光照等均会影响其活性。1.4?国内外研究现状硝酸还原酶（nitrate reductase,NR）是植物体内诱导酶之一，是植物氮素代谢生理的关键酶[3]。它对植物的生长发育、产量形成和蛋白质含量都有重要的影响[4]，很早就引起植物生理学和农学工作者的极大重视。国外在60年代就开始了硝酸还原酶的研究，1973年美国的Hageman研究证明硝酸还原酶的活力可以作为籽粒产量和蛋白质含量的生化指标[5]。目前，国外硝酸还原酶的主要集中于对木本植物的研究，如硝酸还原酶与树木的生长、与树木氮肥的利用等。我国从70年代末80年代初也开展了这方面的工作[6]。近10多年来,众多国内学者对小麦、水稻、玉米、高粱、棉花和豆类等农作物的硝酸还原酶活性、性状及测定方法作了许多的研究。在林业上，中国林科院亚林所周国璋等人研究了杉木硝酸还原酶的活性[7]。1.5?研究目的和意义蔬菜是人们必不可少的副食品之一，提供人们每日所需的各种维生素以及碳水化合物等营养物质[8],但它同时也是一种富氮、喜硝的作物。人体摄入的硝酸盐有80%来自于蔬菜，植物食品是人体吸收硝酸盐的首要来源[8]。膳食中硝酸盐本身对人体无害，绝大部分亚硝酸盐在人体内以“过客”的形式随尿液排出?，过量摄取硝态氮易引起高铁血红蛋白症，进入人体后的硝酸盐可被微生物还原成有毒的亚硝酸盐，亚硝酸还可与次级胺结合成强致癌物亚硝胺，从而诱发食道癌、胃癌、肝癌等[10]。蔬菜的生产是一个物质转化的过程，人们为了在单位面积土地上达到高产的目的，而超施氮肥，造成蔬菜品质的恶化，硝酸盐的积累量上升。因此，硝酸盐在植物体内积累过多已成为影响蔬菜品质并危害人类健康的重要因素，硝酸还原酶（NR）是硝酸盐代谢中的关键酶，硝酸盐被植物体吸收后，首先会被存在于根中或叶肉细胞细胞质中的硝酸还原酶还原为亚硝酸盐，亚硝酸盐被迅速运进质体，在质体中被亚硝酸还原酶还原为NH4+后，才能被植物体利用，因而提高硝酸还原酶活性有利于硝酸盐的降解[11]，从而达到降低蔬菜中硝酸盐含量、增加同等施肥条件下蔬菜的产量。硝酸盐和亚硝酸盐对人体的危害越来越引起人们的关注，因而对于硝酸还原酶的研究也越来越受到重视，特别是硝酸还原酶活性的研究。目前，虽然对于硝酸还原酶的研究很多，但大多数是对于粮食农作物，蔬菜中硝酸还原酶的研究较少，而对于胭脂萝卜这种地方性的品种，硝酸还原酶活性研究未见报道，通过不同条件即不同的温度、pH值、盐浓度等对硝酸还原酶活性的影响来探讨在硝酸还原酶的作用下硝酸盐在胭脂萝卜中的积累，为人们食用安全的低硝酸盐含量的胭脂萝卜和提高胭脂萝卜产量和品质提供科学依据。?2?材料与方法2.1?材料所用的胭脂萝卜是在附近的农贸市场购买。2.2?仪器与设备CR226型冷冻离心机、VIS-7200分光光度计、HH.sy21-Ni电热恒温水浴锅、AR2140电子分析天平、BP1-B-4电子天平、CS101-2EBN电热鼓风干燥箱、BCD-218冰箱2. 3?方法2.3.1实验原理测定硝酸还原酶活性的方法通常采用离体法，利用硝酸还原酶是植物氮素同化的关键酶，它催化植物体内的硝酸盐还原为亚硝酸盐??????????????????NO3－?+ NADH?+ H+??? NR???? NO2－?+NAD+?+ H2O产生的亚硝酸盐与对-氨基苯磺酸（或对-氨基苯磺酰胺）及α-萘胺（或萘基乙烯二胺）在酸性条件下定量的生成红色偶氮化合物。生成的红色偶氮化合物在540nm波长下有最大吸收峰，可用分光光度法测定。硝酸还原酶活