脂肪酶产生菌的筛选及产酶条件的研究.docVIP

【标题】脂肪酶产生菌的筛选及产酶条件的研究 【作者】鲁 雄 【关键词】脂肪酶??筛选??产酶条件??正交试验 【指导老师】戴 玄 【专业】生物科学 【正文】1 ?引言1.1?脂肪酶及其应用概述脂肪酶( EC 3.1.1.3)?,?又称三酰甘油酰基水解酶。在传统酶学中,?脂肪酶是一类水解长链脂肪酸甘油酯生成游离脂肪酸和甘油的界面酶，作为重要的工业用酶,?广泛应用于食品、制革、饲料、洗涤、油酯化工等传统工业领域[1]。1984年，Zaks和Klibanov利用脂肪酶粉在有机溶剂体系中成功合成一系列有机化合物的研究成为了人们对非水相酶学研究的开端。此后，由于非水相体系的水解反应特性显著不同于水相体系的原因，人们对非水相酶的兴趣越来越浓，脂肪酶是非水相酶中非常重要的一类酶，它在非水相体系中具有良好的酯化、转酯、醇解和胺解等特性，因此，对脂肪酶的研究也就越来越多。目前许多工业生产中已大量使用了脂肪酶，如在食品行业中脂肪酶被用于食品加工及品质的改良，在洗涤剂中加入脂肪酶可以大大增加去污效果，在医药行业中脂肪酶被用作生产多不饱合脂肪酸药物等，使得社会对脂肪酶的需求量逐年增加。其实，脂肪酶的工业用途不仅仅在食品加工、洗涤剂、制药、精细化工、有机合成和脱脂等传统工业领域，在一些新的领域，比如生物传感器、诊断工具酶、生物柴油合成等，也存在很大的应用前景，受到广泛的关注[16]。据统计，2004年全球的工业用酶产值已经达20亿美元，而且每年还在以4%-5%的增长率增长，预计到2009年产值将突破24亿美元[8]。随着市场对脂肪酶需求量的不断增加，目前研究的重点主要向着两个方向发展。一是筛选发掘新的脂肪酶高产菌株，使脂肪酶产生菌菌种资源库不断扩大；另一个方向是以市场的需求条件为指导，不断提高现有脂肪酶产生菌菌种的性能，提高生产率[8]。由于目前商业化脂肪酶的价格相对较高，使得脂肪酶的应用受到了局限。在这种情况下，对能筛选到一株产酶条件要求低同时产酶量高的菌种的研究工作期望较高，另外，对脂肪酶产酶条件的研究以提高脂肪酶的产量来降低发酵成本的研究工作也越来越受到研究人员的青睐。1.2 ?研究现状动物、植物和微生物中都普遍存在脂肪酶。其中，动物的胰脏和脂肪组织中含有较多的脂肪酶，而植物中含有脂肪酶较多的是油科类作物的种子。与动物和植物相比，微生物脂肪酶种类较多，广泛存在于细菌、酵母和霉菌中，比如目前报道的用于产生脂肪酶的微生物主要有无根根霉(Rhizopusarrhizus)[2]、扩展青霉(Penicillium expansum)[3]、假丝酵母(Candidarugosa)[4]、假单孢菌(Pseudomonas sp.)[5]等。微生物脂肪酶除了种类较多之外，相对于动物和植物来说，还具有更广的适应pH和温度范围，以及更易于获得和大规模生产，成为了工业脂肪酶的重要来源。早在二十世纪初，微生物脂肪酶便得到了广泛的研究和工业的大规模应用，目前经过研究统计，至少有65个属的微生物能产生脂肪酶，其中细菌28个属、放线菌4个属、酵母10个属、其它真菌23个属，且不同微生物种类产生的脂肪酶不管是在组成成分还是在理化特性等方面都不相同，所有的产脂肪酶微生物的种类占到总微生物种类的2%左右[8]。其中，细菌脂肪酶产生菌在工业生产中的应用相当广泛,这是因为细菌脂肪酶产生菌产生的脂肪酶多为胞外酶，易于液体深层发酵，并且生产也比较容易。目前，在工业生产中应用的比较多的细菌脂肪酶产生菌菌种主要有无色杆菌(Achromobacter)?、产碱杆菌属(Alcaligenes)?、芽胞杆菌属(Bacillus)?、色杆菌(Chromobacterium)和假单胞菌属(Pseudomonas)?等,?尤其是假单胞菌属的细菌脂肪酶应用最为广范。相对于细菌脂肪酶来说，真菌脂肪酶的研究较晚。但是自从1950年开始对真菌脂肪酶的研究之后，发现真菌脂肪酶具有温度和pH?稳定性、底物特异性以及在有机溶剂中具有高酶活性,?且提取成本比较低等优点,?因而发展迅速。在工业运用的真菌脂肪酶产生菌种中，霉菌和酵母菌的种类比较多，如黑曲霉(Aspergillus niger)?,?米曲霉(Thermomyces Lanuginosus)?,?米根霉(Rhizopus oryzae)?,?皱褶假丝酵母(Candida rugosa)?,?南极假丝酵母(Candida antarctica)?,柱状假丝酵母(Candida cylindracea)?等。Fagery认为优良的脂肪酶生产菌种，应该具备发酵周期短、营养基质低廉、菌株易分离、胞外酶、非致病菌、不产生毒素、遗传性状稳定及对噬菌体不敏感等性状[8]，因此尽管产脂肪酶的微生物分布广泛,要筛选到适合的工业生产的脂肪酶产生