【毕业论文】鲫鱼透明骨骼标本的制作探究.docVIP

【标题】鲫鱼透明骨骼标本的制作探究 【作者】程昔春 【关键词】鲫鱼??透明骨骼???固定液??透明液 【指导老师】李宏群 【专业】生物科学 【正文】1?引言1.1?研究意义鱼类是脊椎动物中最低等的一类动物,?但在它的身体中已经出现了十分明显的由许多脊椎骨组成的脊柱。脊椎动物骨骼研究是动物运动生理的重要内容，同时在动物系统学中用于解决动物各分类单元间的系统关系。其中标本的制作非常关键，标本的优劣直接影响研究分类的可靠性。透明骨骼标本的制作通常有3种方法：解剖学方法、X光片法和透明骨骼染色法。在这3种方法中，透明骨骼染色法制法简单，易于识别软硬骨，成本低，国外广泛使用[1]。在探究鲫鱼透明骨骼标本的制作过程中，严格控制鲫鱼材料的选择，固定液和透明液的浓度可以节约制作透明骨骼标本的制作时间，节约材料和试剂，更快更好的制作出鲫鱼透明骨骼标本。鲫鱼透明骨骼标本的制作解决了直接制作骨骼标本容易折断的问题。这种方法比较简单,?并且可以清楚的看到细鱼的骨骼包括卿鱼背部肌肉中的“网骨”，比干制标本具有更明显的直观性,?能十分清楚地看到所有骨在鱼体中的排列顺序和位置取得了较好的教学效果。同时，制作透明骨骼标本，为动物学的骨骼研究、比较解剖学的研究、生物动物学的实验教学均提供了直观、真实的形态学素材。在实验教学中能开阔教师和同学们的视野，激发学生的学习兴趣，使同学们对动物骨骼的发育过程和各骨的位置关系有更直接的感性认识，更好地巩固理论知识。并且制作简单，可以长期保存，作为陈列和展览所用。1.2?研究原理透明骨骼标本是用化学和物理的方法使软组织和透明剂的折光率相近，达到软组织透明而使骨组织和特殊处理的组织被显现出来。组织透明以后，可显示用一般解剖方法难以观察清楚的结构，在保持标本外形完整的情况下显示出体内器官的结构及其相互关系[2-4]。1.3?国内外现状1858年，Beal首次制作出人体的胚胎透明标本[5]，1897年，Schulze用2%一3%的氢氧化钾茜素红及甘油制作了胚胎骨骼的染色标本[6]。茜素红骨骼染色技术，自从1926年Dawson开始采用后[7]，被许多学者采用并加以改进。1958年，我国钟世镇院士等[6]用丙酮、氯仿、乙醚、冰醋酸混合液加速脱水制作了冬青油透明标本。目前关于透明标本的制作已经引起了广大科学家的兴趣[8-9]。从开始探究制作透明骨骼标本至今，我国先后有不少人士对透明骨骼标本的制作进行了探究，研究出了制作透明骨骼标本的简易方法，例如陈彬和王跃招介绍的一种透明骨骼标本染色法[1]；李文,黄飞和王利民等对大鼠骨骼染色透明标本的研究[5]；郭连军和刘文庆的胚胎骨骼染色透明标本的制作等[10]。除此之外，我国不少人士还研究了透明骨骼标本的保存方法，如王玉欣的保色标本和透明标本的制作[3]和霍丽荣的透明骨骼标本的制作、维护和反油和发黄的处理[11]等。1.4?应解决问题时至今日，透明骨骼标本的制作在哺乳动物胚胎如人或小鼠等研究较多，也有对两栖类如青蛙的透明骨骼标本制作方法的研究，但是对水生动物透明骨骼标本制作方法研究得较少，尤其是鲫鱼制备过程中的技巧等情况，缺乏深入探究。一般小型的脊椎动物都适合做透明骨骼标本，因为小型动物骨骼纤细软弱[10]，而且小型动物的骨骼各个关节部位没有完全骨化，做出的效果好，透明度高，制作出来的透明标本清晰美观而且有立体感。动物类：蟾蜍、鲫鱼、小白鼠等选择材料以幼龄为宜[9]。哺乳类小动物10cm左右为宜。制做胚胎骨骼染色透明标本有冬青油透明法、硫酸铜浸透法、苯与冬青油透明法等。常用透明剂的折光指数（Nd）和性能各不相同[12]。二甲苯（Nd=1.497）有易燃和具有毒性的特点，对人体的伤害大；冬青油（Nd=1.534）是一种较理想的透明剂，但市场价格高，制作成本较大；甘油（Nd=1.443）的市场价格较适中，对人体无伤害。尽管甘油的折光指数小于其它透明剂，但只要在脱水、净化和初步透明等环节严格控制，仍可以制作出较满意的透明标本。而脱水、净化和初步透明等环节控制过程中各种试剂的浓度比例应严格控制，许多的骨骼标本会因透明过度或试剂浓度过高过低而导致透明效果不好甚至失败。制作透明标本，是利用一些化学药品或物理方法处理机体组织，使其折光率与透明剂或周围介质相近，以达到透明的目的[12-16]?。综上，鲫鱼作为透明骨骼标本制作的实验对象，而固定和透明液浓度的控制便成为了本实验的探究内容。近几年，骨骼透明标本应用于医学影像专业解剖学教学，由于真实直观收到了良好的教学效果[17]，为后续影像学专业课的教学及临床应用打下了坚实的基础，也为骨骼发育的教学和科研提供了有效的形态观察方法。2?研究方法2.1?鲫鱼的选择取新鲜的鲫鱼20厘米2条、死后六小时的20厘米鲫鱼