医学论文：食管癌术前腺病毒载体转染p53基因提高肿瘤放射敏感性的实验.docVIP

浅谈关键词：?肿瘤?放射疗法?基因疗法?p53基因? 　　几十年来，许多放射生物学和放射肿瘤学专家致力于寻找提高肿瘤放射敏感性的理想药物，试用了生物还原剂、亲电子化合物、修复抑制剂等诸多药物，均因效果欠佳或毒性大而未能广泛应用于临床［1］。近年来分子生物学迅猛发展，为肿瘤学和放射肿瘤学研究提供了新的线索。癌基因、抗癌基因及细胞内信号传导的研究进一步丰富了放射线治疗肿瘤的理论［2-4］。因此作者综述?p53基因转染提高肿瘤放射敏感性的实验研究进展。 　　1　p53基因与肿瘤放射敏感性　　 　　近年来的研究证明，细胞受到射线照射之后所发生的一系列变化都与基因有关［5-7］。射线引起细胞内双链断裂之后，?dna依赖的蛋白激酶（?dna?dependentprotein?kinase，?dna-pk）或共济失调性毛细管扩张症突变基因（?mutated?in?ataxia?telangiectasia，?atm）把信号传递给?p53基因，其表达产物为?p53蛋白。?p53蛋白利用其羧基域直接识别?dna损伤，同时通过反式激活上调另一种抑癌基因?waf1／?cip1（?wild-typep53-activated?frag-ment1／?cdk?interacting?protein1），表达产生一种相对分子质量为21×103的蛋白质?p21，后者抑制增殖细胞核抗原和多种细胞周期素，如细胞由?g1期进入?s期所必需的细胞周期素?d（?cyclind）、细胞周期素依赖的激酶4（?cyclin?dependent?ki-nase4，?cdk4）及?cycline和?cdk2，使分裂细胞阻滞于?g1期，保证细胞在复制?dna之前有足够的时间修复损伤的?dna。如果细胞?dna损伤未能得到及时修复，则可能?p53蛋白会进而下调?bcl-2基因和（或）上调?bax基因，引起细胞凋亡。野生型?p53（?wild-typep53，?wtp53）基因突变成为突变型?p53（?mutant-typep53，?mtp53）基因之后，则不但诱导凋亡的作用消失，反而抑制凋亡［8］。参与诱导凋亡的还有?apo-1，?fas基因及肿瘤坏死因子α（?tumor?necrosis?factorα，?tnf-α）等，参与抑制凋亡的基因还有?h-ras，?e1b等［9］。 　　多数临床研究证明?p53基因与肿瘤放射敏感性有关，如：放射治疗疗效较好的肿瘤（髓母细胞瘤、头颈肿瘤、宫颈癌）?p53基因突变提示预后不良［10］；放射敏感的肿瘤（精原细胞瘤，神经母细胞瘤）?p53突变率低；神经系统中放射抗拒的星形细胞瘤?p53突变率高，而其他肿瘤?p53突变率低。但也有相反的报告，放射敏感的淋巴瘤和小细胞肺癌?p53基因突变相当常见，而放射抗拒的恶性黑色素瘤又缺乏?p53突变［11，12］。 　　大多数实验室研究也证明?p53与细胞放射敏感性有关，如表达内源性突变型?p53的细胞和野生型?p53敲除（?knock?out）的细胞的放射敏感性下降［10］；转染外源?mtp53基因细胞和转染无效?p53基因（?null?p53?transgenic）细胞放射敏感性下降，而外源?wtp53基因转染能抑制无?wtp53蛋白细胞的生长；?p53蛋白被猿猴病毒（?simian?virus?40，?sv40）大?t抗原和?hpv-e6基因失活的细胞放射敏感性下降。但也有人报告表达?mtp53的细胞放射敏感性增高，转染?mtp53的纤维母细胞放射敏感性增高［10，13，14］。 　　上述研究结果有分歧的原因：（1）判断?p53对放射敏感性影响的标准不一致。（2）各实验采用的细胞来源不统一。（3）免疫组化法难以完全准确地反映?p53蛋白的功能［10］。一般认为?wtp53蛋白半衰期仅6～20分钟，?mtp53蛋白半衰期长达数小时。免疫组化阴性提示细胞内?p53基因突变，但一些情况下组化阴性时?p53蛋白已失去功能，如：?p53基因无义或移码突变、转录错误、结构重排以及?p53构型改变、不能进入细胞核、降解加快等，而另一些情况下免疫组化阳性时?p53蛋白又可能具有一定的功能，如?wtp53蛋白积聚或?mtp53蛋白保留部分功能［15，16］。 　　2　?p53基因转移的载体　 　　目的基因确定之后，基因转染的另一个重要问题就是选择基因转染的方法。裸鼠?dna直接注射方法简便，缺点是转染范围限于注射部位附近的细胞、缺乏组织靶向性。近来有学者采用金粒携带?dna高速轰击组织，在肝脏和肿瘤组织中表达目的基因，同样也存在类似的缺点［3］。利用载体转染基因是目前基因治疗实验研究中常用的方法，理想的载体应具有：（1）准确的靶向性，即特异地定位于某种细胞以减少副作用。（2）较高的转染效率。（3）外源